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1目的支架植入术是目前冠心病治疗的主要方式之一,支架内再狭窄已经成为介入心脏病学领域的主要难题。药物洗脱支架能有效地降低再狭窄的发生率,给冠脉介入治疗再狭窄的防治带来了新的希望。目前临床常用的有雷帕霉素(Rapamycin)洗脱支架和紫杉醇(paclitaxel)洗脱支架,但药物洗脱支架的使用也面临许多问题,如远期效果、价格昂贵等。以往研究表明,葛根素具有显著促进血管平滑肌细胞(Vascular smooth musle cell,VSMC)凋亡,抑制血管平滑肌细胞增殖,抑制血管内膜增生,保护内皮细胞,抑制血小板聚集、抗炎等功能。本课题制作葛根素洗脱支架进行动物实验,并与裸支架、PC涂层支架以及临床应用的国产雷帕霉素洗脱支架(FirebirdTM)进行比较,观察葛根素对家兔髂动脉支架植入术后再狭窄的疗效,探讨葛根素药物洗脱支架能否有效抑制内膜增生,能否抑制支架内再狭窄的发生;并进一步体外实验考察葛根素能否有效抑制VSMC的增殖和迁移,并初步探讨其作用机制。2方法本实验分为三个部分:2.1葛根素对VSMC迁移及MMP-9、MMP-2影响。(1)主动脉VSMC的分离培养及鉴定;(2)噻唑蓝(MTT)比色法测定葛根素对体外培养的VSMC增殖和活性的影响;(3)Transwell法测定葛根素对VSMC迁移的影响;(4)Elisa法和明胶酶谱法测定葛根素对VSMC中迁移相关蛋白MMP-9、MMP-2影响;2.2葛根素对胶原分泌及基底膜成分的影响(1)葛根素对VSMC分泌羟脯氨酸含量的影响;(2)放免法测定葛根素对内皮细胞分泌基底膜成分层粘连蛋白、Ⅳ型胶原含量的影响;2.3家兔髂动脉支架植入术观察葛根素洗脱支架的疗效。行家兔髂动脉支架植入术,四周后处死,取支架植入处血管切片。(1)进行HE染色,用病理分析软件计算管腔面积、内膜面积及中膜面积;(2)免疫组化法观察VEGF表达情况;(3)术前及处死动物前取静脉血测定ALT、BUN。3结果3.1与IL-1β组相比,葛根素10umol/L、1umol/L能显著减少Transwell培养板中VSMC迁移(p<0.01,p<0.05)。3.2与IL-1β组相比,葛根素10umol/L、1umol/L可显著抑制VSMC中MMP-9的表达(p<0.01);葛根素10umol/L可显著抑制VSMC中MMP-2的表达(p<0.05)。3.3与对照组相比,10umol/L葛根素能显著降低VSMC培养上清中羟脯氨酸含量(p<0.05)。