钙粘附蛋白在人类胚泡着床中的作用及其一氧化氮、白介素-1调控机制的研究

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目的:(1)探讨钙粘附蛋白在胚泡着床过程中的作用;(2)观察分泌中期子宫内胰腺上皮细胞高峰表达上皮型钙粘附蛋白(E-cadherin),是否与一氧化氮(NO)及白介素-1(IL-1)有关;(3)观察NO、IL-1对分泌中期人子宫内膜细胞内游离钙离子浓度的影响,以探讨其作用机制。 方法:(1)应用特异性单克隆抗体,采用免疫组织化学方法,检测正常生育妇女和不孕妇女月经周期不同阶段的子宫内膜上皮型钙粘附蛋白(E-cadherin)的表达;应用特异性单克隆抗体,间接免疫荧光法,对人卵细胞、卵裂期胚、囊胚E-cadherin的表达进行观察和定量分析;(2)原代培养人分泌中期子宫内膜腺上皮细胞,用间接免疫荧光法标记,流式细胞仪检测经一氧化氮合酶抑制剂L-NAME、白介素-1受体拮抗剂IL-1ra作用后,腺上皮细胞E-cadherin抗原表达的变化;(3)原代培养人分泌中期子宫内膜,采用激光扫描共聚焦显微镜测定加入一氧化氮合酶抑制剂L-NAME及IL-1ra后,子宫内膜细胞内游离钙离子[Ca2+]i浓度的动态变化。 结果:(1)正常子宫内膜腺上皮在植入窗期表达E-cadherin的量最高;不孕妇女植入窗期腺上皮表达E-cadherin较正常妇女低(P<0.05);间质细胞未见E-cadherin表达;卵细胞、卵裂期胚、囊胚表面均见E-cadherin表达,以囊胚期表达最强;(2)抑制NO产生或阻断IL-1r均使分泌期子宫内膜腺上皮细胞表达E-cadherin降低;(3)加入L-NAME后,[Ca2+]i升高,子宫内膜细胞[Ca2+]i显著升高;加入IL-1ra后,子宫内膜细胞[Ca2+]i持续缓慢升高,升高幅度较加入L-NAME后的幅度低。 结论:(1)E-cadherin参与了子宫内膜“植入窗”的开放,其在子宫内膜表达的时间及量的异常,可能是不孕症发病的重要原因之一;E-。adherin在“植入窗”期内膜及胚泡同时大量表达对胚泡成功着床有重要意义;(2)NO或卜 1对 E.cadherin在子宫内膜的表达有直接的调控作用,也可能是雌、孕激素调节子宫内膜表达E.cadherin的另一途径之一;()NO或 IL.l 在实现其生理效应过程中改变了子宫内膜细胞[Ca’V。
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