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第一部分LRP蛋白在结直肠癌组织中的表达情况目的:检测LRP蛋白在结直肠癌组织中的表达。方法:1通过Real-time qPCR和Western blot实验分别检测LRP在正常结直肠组织和结直肠癌组织中RNA水平和蛋白质水平的表达。2通过免疫组织化学标记法检测组织芯片中LRP在正常结直肠组织和结直肠癌组织中的表达情况。结果:1.Real-time qPCR实验和Western blot实验分别证明在结直肠癌组织中LRP的RNA水平和蛋白质水平均显著高于正常直肠组织。2.结直肠组织芯片免疫组化结果表明,LRP在结直肠癌组织中高表达。第二部分LRP蛋白对结直肠癌细胞系生物学特征的影响及其对化疗耐药作用机制研究目的:我们研究LRP蛋白对结直肠癌细胞增殖、迁移等相关生物学行为的影响,并进一步探讨LRP蛋白在结直肠癌化疗敏感性中的影响和分子机制。方法:1通过RTCA MP实时细胞功能分析仪检测LRP基因敲降后对结直肠癌细胞增殖的影响。2通过Transwell实验检测LRP敲降后对结直肠癌细胞的侵袭、迁移能力的影响。3通过生长克隆实验检测LRP敲降后结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的影响。4检测分别经顺铂、5-氟尿嘧啶以及野生型p53质粒转染处理后的结直肠癌细胞系SW480(p53突变型细胞)、HCT116(p53野生型细胞)后细胞中LRP蛋白的表达变化情况。5通过Targetscan软件预测LRP基因潜在的mi RNA。6并用双荧光素酶报告基因(Luciferase Reporter)实验以及Western blot实验验证mi RNA对LRP的影响。7通过Western blot实验验证p53通过miRNA对LRP进行调控。结果:1.RTCA MP实时动态监测细胞生长实验表明,敲降LRP后结直肠癌细胞HCT116的生长增殖能力减弱(P<0.05)。2.Transwell实验验证敲降LRP后结直肠癌细胞HCT116的侵袭以及迁移能力均明显减弱(P<0.001)。3.增殖实验结果显示,敲降LRP联合5-氟尿嘧啶处理后结直肠癌细胞的增殖能力弱于5-氟尿嘧啶处理后的增殖能力。4.Western blot实验证实,SW480(p53突变型细胞)经过顺铂、5氟尿嘧啶处理后,LRP蛋白表达量升高;HCT116(p53野生型细胞)经过顺铂、5氟尿嘧啶处理后,LRP蛋白表达量降低;转染野生型p53质粒后,SW480和HCT116的LRP蛋白表达量均降低。5.Targetscan软件预测LRP基因的上游调控的潜在分子为mi R-34a.6.双荧光素酶报告基因(Luciferase Reporter)实验以及Western blot实验表明,mi R-34a能直接靶向调控LRP蛋白的表达。7.Western blot实验表明,野生型p53通过miR-34a下调LRP蛋白表达,而p53突变后会失去对LRP的抑制能力。结论:LRP在结直肠癌组织中表达显著上调;LRP具有癌基因功能,且具有化疗抵抗作用;p53可以通过miR-34a来调控LRP蛋白的表达。