TrkB(tropomyosin-related kinase B)是Trk家族成员之一，Trk基因最初作为一种癌基因被克隆出来，在胞外区与tropomyosin基因融合，其酪氨酸激酶活性组成型活化，能够诱导细胞的不断增殖。后来发现原癌基因Trk是神经生长因子(NGF)的高亲和力受体，在调节神经系统发育过程中细胞分化和程序性细胞死亡具有重要作用。TrkB是神经营养因子BDNF的受体，是一种受体酪氨酸激酶，在抑制细胞凋亡，促进肿瘤细胞侵袭转移方面起着非常重要的调控作用。TrkB在多种人类肿瘤中过表达，与细胞凋亡和侵袭等信号通路的异常有关，从而与恶性肿瘤的演进和转移关系密切。研究表明，TrkB表达上调可以通过形成多细胞团并诱导细胞耐受脱壁诱导的凋亡，促进肝癌发生转移，Sclabas GM等人也发现TrkB过表达导致其下游信号通路活化，介导胰腺癌细胞的侵袭性生长和转移。TrkB过表达与Wilms’肿瘤患者死亡率的增加相关，并可以作为预测胃癌发生远隔转移和不良预后的指标。因此目前认为TrkB对于恶性肿瘤的发生发展具有促进作用。TrkB是一种营养神经的酪氨酸激酶受体，参与调节细胞内多种信号转导通路及其生物学功能。目前研究主要集中于生理或病理条件下，TrkB通过PI3K信号通路有效并特异的抑制与caspase相关的非恶性上皮细胞失巢凋亡。TrkB能够诱导形成大细胞团，使细胞在悬浮状态下存活并增殖。在小鼠动物实验中，这些细胞迅速形成浸润淋巴管和血管的肿瘤，并转移至远隔器官。与TrkB抑制失巢凋亡的能力一致，转移灶内（无论是小血管浸润灶或大肿瘤结节）含有非常少的凋亡细胞。这些结果表明TrkB具有较强的促癌作用，以及特异的促存活功能，有助于肿瘤转移，这可能是过表达TrkB的人类肿瘤具有侵袭性的原因。阻断TrkB能够抑制胚胎的发育和存活，体内实验也证实TrkB抑制剂可以阻断早期胚胎发育并促进胚泡凋亡。TrkB通过PI3K信号转导通路介导人胚胎干细胞的存活，抑制TrkB后导致人胚胎干细胞凋亡。然而，很多研究小组发现高侵袭力的肿瘤细胞中TrkB蛋白表达上调。TrkB在多种肿瘤细胞中通过PI3K信号通路的活化，抑制细胞失巢凋亡，促进肿瘤转移，因此TrkB对于肿瘤的发生发展具有重要作用。研究表明TrkB也能够活化其他信号转导通路，调节神经母细胞瘤侵袭，TrkB通过JNK信号通路的活化，促进星形细胞瘤生长，有助于肿瘤恶性转化。在对结肠癌的研究中，Bardelli等人发现TrkB基因存在点突变，但目前还没有TrkB在结肠癌细胞中的表达与ERK信号通路活化关系的相关报导。　　TrkB与肿瘤的关系正日益受到关注。尽管有报道发现结肠癌中TrkB基因发生点突变，但其对于TrkB生物学功能的影响还不明确，而且目前还没有关于TrkB在结肠癌组织中表达情况的文献报道。本研究的目的在于探讨60例手术切除的结肠癌组织中TrkB蛋白表达及其临床意义，比较TrkB在30例结肠癌和癌旁组织中表达水平的差异，并分析二者之间的关系。我们研究发现，TrkB在结肠癌组织中过表达，但目前TrkB是否通过抑制肿瘤细胞凋亡从而有助于结肠癌转移，以及TrkB对于结肠癌发生发展的作用还不明确。本研究同时探讨30例手术切除的结肠癌癌旁淋巴结转移灶中TrkB的表达与肿瘤细胞凋亡的关系。我们在细胞水平上分别应用特异性TrkB-siRNA瞬时转染及ERK特异性抑制剂处理SW620细胞，分别探讨干扰TrkB蛋白表达和抑制ERK活化对细胞增殖、凋亡和侵袭以及细胞内ERK磷酸化水平的影响。我们发现下调TrkB蛋白表达抑制ERK磷酸化，同时促进SW620细胞凋亡，抑制细胞增殖和侵袭;阻断ERK活化抑制SW620细胞侵袭，但对细胞增殖和凋亡没有影响。研究结果提示，TrkB可能通过ERK信号转导通路增强SW620细胞的侵袭能力，从而促进结肠癌发生转移。TrkB可能通过其他信号通路影响SW620细胞的增殖和凋亡，但还有待于进一步研究。　　材料与方法:　　结肠癌组织标本:60例新鲜结肠癌标本均来自辽宁省肿瘤医院大肠外科2006年3月至8月手术切除标本。患者术前均未接受过任何化学或放射治疗。福尔马林固定石蜡包埋的肿瘤组织切片常规进行HE染色，分别由两名病理诊断医师，根据2002年美国癌症联合会(AJCC)结直肠癌分级系统，确定肿瘤的组织学分型。60例结肠腺癌包括:高分化癌28例，中分化癌24例，低分化癌8例;肿瘤直径＜5cm者18例，≥5cm者42例;淋巴结转移21例，无淋巴结转移39例。　　30例配对的结肠癌和癌旁组织（距离瘤缘≥5cm）来自辽宁省肿瘤医院大肠外科2006年3月至6月手术切除标本。在液氮中快速冰冻，以后用于提取蛋白。常规病理检查手术切除淋巴结，确定结肠癌的淋巴结转移情况。　　转移淋巴结标本:30例转移结肠癌癌旁淋巴结标本均来自辽宁省肿瘤医院大肠外科2006年3月至11月手术切除标本。患者术前均未接受过任何化学或放射治疗。福尔马林固定石蜡包埋的肿瘤组织切片常规进行HE染色，分别由两名病理诊断医师，根据2002年美国癌症联合会(AJCC)结直肠癌分级系统，确定肿瘤的组织学分型。30例结肠腺癌包括:高分化癌11例，中分化癌13例，低分化癌6例;原发肿瘤直径＜5cm者10例，≥5cm者20例;。常规病理检查手术切除淋巴结，确定结肠癌的淋巴结转移范围。　　Western blot:向冰冻组织（包括结肠癌和癌旁组织）加入10倍体积的含有20mM Tris-HCl,1mM EDTA,50mM NaCl,50mM NaG1mM Na3VO4,1％Triton-X100和磷酸酶抑制剂(1mM PMSF)的组织裂解缓冲液，置于冰上匀浆;4℃下15000rpm离心30min，收集上清并保存于-70℃备用;考马斯亮蓝法检测蛋白浓度;上样总蛋白为80μ g，8％ SDS-PAGE电泳后转移至PVDF膜;5％脱脂奶粉封闭，兔抗人TrkB(1∶200)和兔抗人β-actin(1∶300)4℃孵育过夜;山羊抗兔IgG(1∶2000)37℃孵育2h;最后ECL发光。EC3 Imaging System(UVP Inc.，USA)凝胶成像系统采集图像，Image J软件用于半定量分析特异性条带的灰度值。将目的蛋白与β-actin灰度比值作为相对表达量。　　免疫组化染色SP法:60张结肠癌组织切片常规脱蜡并水化。染色步骤简述如下:0.1mol/L Tris-HCl(pH10.0)缓冲液，高温高压修复抗原2min;3％ H2O2和5％山羊血清37℃下分别孵育切片1h;兔抗人TrkB(1∶100)4℃孵育过夜;山羊抗兔IgG和SP复合物37℃分别孵育切片30min;最后DAB显色，苏木素复染细胞核。同时设立阳性和阴性对照。两名病理诊断医师分别对组织切片染色情况进行评分。胞膜或胞浆出现棕黄色颗粒视为阳性细胞。至少5个高倍视野下(×400)，评价TrkB染色强度（1=弱，2=强）和阳性肿瘤细胞百分比（0=阴性，1-50％=1，51-75％=2，≥76％=3）。上述两项评分的乘积作为每个标本染色的最终评分，最后确定结肠癌标本的染色情况分别为阴性:0分;低表达:评分≤3;或高表达:评分＞3。　　TUNEL染色:切片常规脱蜡至水，PBS洗5min，蛋白酶K室温孵育切片15min。将50μl TdT与450μl荧光素标记的dUTP液混匀，制备TUNEL反应混合液。玻片干后加50μl TUNEL反应混合液，同时设立阳性和阴性对照，加盖玻片在37℃湿盒中避光孵育1h。PBS洗3次，玻片干后加50μl converter-POD，加盖玻片在37℃湿盒中避光孵育30min。PBS洗3次后，DAB显色，苏木素复染细胞核。最后梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。以细胞核出现明显的棕黄色颗粒为凋亡细胞，200×镜下随机选取5个视野，观察并计数凋亡细胞，细胞凋亡率=（凋亡细胞数/同一视野下细胞总数）×100％。　　细胞培养及瞬时转染:人高转移SW620和低转移SW480结肠腺癌细胞系均用高糖DMEM培养基培养，添加10％胎牛血清，100U/ml青、链霉素和NaHCO3，5％CO2、37℃条件下培养。细胞培养至亚融合状态时提取蛋白。细胞实验均重复3次。瞬时转染按试剂说明书进行，首先用无血清无抗生素的DMEM培养基稀释TrkB-siRNA，充分混匀后加入Lipofectamine2000，室温孵育15-20min后加入细胞，继续培养24h，收集细胞并提取蛋白。　　MTT法检测细胞增殖:胰酶消化细胞，培养液重悬细胞并制成单个细胞悬液，浓度调整为5×103个/ml，以每孔1×103个细胞接种到96孔板，每孔体积200μ l，同时设置3个复孔。检测前4h向每孔细胞中加入20μ lMTT(5mg/ml)。4h后终止培养，吸净孔内培养上清液，加入150μ lDMSO，涡旋振荡10min，充分混匀。选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔吸光度值，以时间为横坐标，平均吸光度值为纵坐标绘制细胞生长曲线。　　AnnexinⅤ-FITC双染检测细胞凋亡:用冰冷PBS洗细胞2次，1×bindingbuffer重悬细胞，调整细胞浓度为1×106个/ml。取100μ l细胞液（1×105个）至新EP管。加5μ lAnnexin V-FITC和5μ lPI。轻柔涡旋细胞混匀，室温(15℃)避光孵育15min。再加入400μ l1×binding buffer，之后上流式细胞仪分析。分别设置空白对照（只有细胞不加染料）和AnnexinⅤ-FITC单染及PI单染对照。结果为3次实验的平均值。　　Transwell细胞侵袭实验:采用Transwell小室测定SW620细胞侵袭能力的变化。用预冷的无血清DMEM以1∶6稀释Matrigel（基质胶），上室加入100微升稀释后的Matrigel，同时避免产生气泡，37度孵箱中放置2h，使用前加入200微升无血清DMEM冲洗以重新水化并吸净。TrkB-siRNA瞬时转染高转移SW620细胞24h或ERK特异性抑制剂PD98059处理细胞24h后，将1×103个细胞接种在包被Matrigel的膜上并继续培养24h。下层小室加入含有15％ FBS的DMEM完全培养基。用棉签小心擦去膜上表面未发生侵袭的细胞，而侵袭至膜下表面的细胞经4％多聚甲醛固定后用Hoechst33342染细胞核，倒置荧光显微镜下观察。随机选取5个高倍视野计数侵袭细胞数。实验至少重复3次，取平均值。　　实验结果:　　30例结肠癌组织中TrkB的表达高于癌旁组织，其中淋巴结转移组TrkB的表达高于无淋巴结转移组。统计学分析表明，结肠癌和癌旁组织中TrkB表达的相对灰度值分别为1.04±0.26和0.71±0.25，二者比较具有显著的统计学差异(P=0.000)。淋巴结阳性和阴性组中TrkB表达的相对灰度值分别为1.15±0.17和0.95±0.29，二者比较有统计学意义(P=0.028)。统计学分析显示，TrkB在结肠癌组织中表达上调，而且淋巴结阳性的结肠癌组织中TrkB表达水平较高。　　在癌旁组织中可见TrkB蛋白低表达。60例结肠组织均有不同程度的TrkB表达。我们观察到40例(66.7％)结肠癌组织呈TrkB高表达（多于50％肿瘤细胞强着色，评分＞3）。同时我们对TrkB表达与临床病理参数之间的关系进行了统计学分析。我们发现结肠癌淋巴结转移组中TrkB高表达率显著高于无淋巴结转移组(P=0.022)。而且TrkB高表达与肿瘤大小(T＜5cm vs T≥5cm，P=0.232)和分化程度（高中分化vs低分化，P=0.422）均无关。　　30例结肠癌癌旁淋巴结转移灶均有不同程度的TrkB表达。我们观察到22例(73.3％)转移灶呈TrkB高表达（多于50％肿瘤细胞强着色，评分＞3）。同时我们对TrkB高表达与淋巴结转移范围之间的关系进行统计学分析。我们发现，癌旁淋巴结以远淋巴结转移组TrkB高表达率为92.9％(13/14)，显著高于癌旁淋巴结转移组TrkB高表达率，两组间差异具有统计学意义(P=0.039)。　　30例结肠癌癌旁淋巴结转移灶中肿瘤细胞凋亡率为6.9-23.5％，平均为12.5％。同时我们对TrkB高表达与细胞凋亡之间的关系进行统计学分析。我们发现，癌旁淋巴结转移灶中高表达TrkB的肿瘤细胞平均凋亡率为11.6％，显著低于低表达TrkB的肿瘤细胞的平均凋亡率，为15.0％，两组间差异具有统计学意义(P=0.021)。　　TrkB的表达以及ERK磷酸化与高转移SW620细胞的侵袭能力相关:我们对SW480和SW620细胞中TrkB蛋白表达和ERK磷酸化水平进行了比较。作为对照，低转移SW480细胞中TrkB蛋白水平较低，同时在SW480细胞中也观察到低水平磷酸化的ERK。而高转移SW620细胞表达较高水平的TrkB蛋白，同时ERK的磷酸化水平也较高。此外，Transwell细胞侵袭实验表明24h时侵袭至下层小室的SW620细胞数(42.9±7.6)显著多于SW480细胞(23.8±3.9，P=0.000)。因此，我们认为TrkB的表达与SW620细胞的侵袭能力相关，ERK可能参与调节SW620细胞侵袭的信号转导过程。　　干扰TrkB蛋白表达抑制SW620细胞增殖:我们应用特异性siRNA转染高表达TrkB的SW620细胞，研究其对细胞增殖的影响。TrkB-siRNA转染5d后，SW620细胞数显著低于对照组和non-silencing细胞(P=0.001)，结果表明特异性TrkB-siRNA能够显著抑制SW620细胞增殖。　　干扰TrkB蛋白表达促进SW620细胞凋亡:我们应用特异性siRNA转染高表达TrkB的SW620细胞，研究其对细胞凋亡的影响。对照组、non-silencing和TrkB-siRNA转染组，SW620细胞的凋亡率分别为(6.10±1.95％，8.77±1.60％及25.81±2.95％，P=0.000)，结果表明TrkB-siRNA能够显著促进SW620细胞凋亡。　　干扰TrkB蛋白表达阻断SW620细胞侵袭:我们应用特异性siRNA转染高表达TrkB的SW620细胞，研究其对细胞侵袭能力的影响。我们对TrkB-siRNA转染前后SW620细胞的侵袭情况进行了比较。对照组、non-silencing和TrkB-siRNA转染组，24h后侵袭至下层小室的细胞数分别为(45.6±3.8，42.8±1.9及27.6±2.6，P=0.001)，结果表明TrkB-siRNA能够抑制SW620细胞侵袭能力。　　干扰TrkB蛋白表达抑制ERK磷酸化:TrkB-siRNA转染后，TrkB蛋白表达减少，而且SW620细胞中ERK的磷酸化水平降低。因此，TrkB蛋白可能通过活化ERK影响SW620细胞的生物学行为。这些结果表明，TrkB蛋白促进SW620细胞增殖和侵袭可能与ERK信号通路的活化相关。　　应用ERK特异性化学抑制剂处理细胞对于SW620细胞增殖、凋亡和侵袭的影响:我们应用SW620细胞研究参与TrkB相关的ERK信号转导通路。ERK抑制剂明显降低了p-ERK水平，而对ERK蛋白表达没有影响。对SW620细胞应用ERK抑制剂作用5d后，我们发现对照和处理组中SW620细胞数没有显著的统计学差异(P=0.544)，这表明特异性ERK抑制剂并不能影响SW620细胞增殖。我们进一步研究ERK抑制剂对SW620细胞凋亡的影响。ERK抑制剂作用细胞24h后，对照和处理组中，SW620细胞的凋亡率分别为（6.28±1.59％和9.44±2.06％），两组比较无差异(P=0.103)，结果表明ERK抑制剂对SW620细胞凋亡没有作用。最后，我们探讨了ERK抑制剂对SW620细胞侵袭能力的影响。对照组和ERK抑制剂组，24h后侵袭至下层小室的细胞数分别为42.8±1.9和23.9±1.3，两组比较有显著的统计学差异(P=0.000)，因此阻断ERK活化能够显著抑制细胞侵袭，进一步表明ERK信号通路可能参与了TrkB介导的细胞侵袭过程。　　讨论:　　TrkB是一种受体酪氨酸激酶，其过表达通常与肿瘤转移潜能增加相关，如神经母细胞瘤和胰腺导管癌，并认为直接导致这些肿瘤的侵袭行为。TrkB在多种人类肿瘤中过表达，参与调节肿瘤细胞的恶性生物学行为。TrkB过表达促进早期星形细胞瘤和胶质母细胞瘤的形成，并有助于神经母细胞瘤耐受化疗药物诱导的细胞死亡。然而，研究表明TrkB对于小鼠胚胎和神经系统发育至关重要。我们免疫组化结果也显示结肠癌癌旁组织中腺上皮细胞有TrkB低表达，提示TrkB低水平表达可能有助于维持正常细胞的生长和分化。　　研究表明，TrkB在前列腺癌组织中高表达，广泛表达于分级高的乳腺癌组织，但目前TrkB在结肠癌组织中表达的研究尚未见报道。本研究应用western blot方法比较了30例结肠癌和癌旁组织中TrkB蛋白表达水平的差异。结果显示结肠组织中TrkB蛋白表达水平显著高于癌旁组织，二组间差异具有显著的统计学意义。同时免疫组化结果也显示TrkB蛋白在结肠癌组织中均有表达，其中40例结肠癌为高表达(66.7％)，而癌旁组织中TrkB均为低表达。我们的结果提示TrkB蛋白过表达可能与结肠癌的发生有关。　　我们进一步对TrkB高表达与结肠癌患者临床病理参数之间的关系进行统计学分析发现，淋巴结转移组TrkB高表达率为85.7％(18/21)，而无淋巴结转移组TrkB高表达率为56.4％(22/39)，二组间差异具有显著的统计学意义。结果提示随着结肠癌出现淋巴结转移，TNM分期的增高，TrkB表达也逐渐增强。这提示我们TrkB可能与结肠癌的发展有关。　　有人研究发现，TrkB的配体BDNF在多发性骨髓瘤中具有显著的促血管新生作用，Nakamura K等也发现TrkB被其配体BDNF活化后能够诱导血管内皮生长因子的表达，从而导致血管发生以及新生血管的形成，促进肿瘤转移。我们的免疫组化结果显示TrkB高表达于某些肿瘤间质中的内皮细胞，因此TrkB是否能够通过诱导淋巴管新生，从而促进结肠癌淋巴结转移还有待于进一步研究。　　本研究观察到TrkB在癌旁组织中低表达，但TrkB在结肠癌组织中的表达显著上调，而且随着结肠癌淋巴结转移和TNM分期的增高而逐渐增强。这提示我们，TrkB可能在结肠癌的发生发展过程中起着重要作用。然而TrkB蛋白在结肠癌中的调节机制仍需要细胞水平上的研究。　　转移是结肠癌恶性生物学行为的主要表现之一，通常是肿瘤治疗失败的主要原因。失巢凋亡（即缺少细胞-细胞外基质相互作用导致的细胞凋亡）被认为是阻断肿瘤转移的生理性屏障。耐受失巢凋亡的肿瘤细胞可以在循环系统内存活，因此能够在远隔器官内形成转移灶。研究发现，TrkB过表达有助于骨髓瘤细胞的存活，而阻断TrkB信号通路可以显著降低神经母细胞瘤细胞的生存能力。TrkB在多种人类肿瘤中过表达，能够增强肝癌细胞的侵袭能力，促进甲状腺髓样癌的发展演进，Zhao等也发现TrkB广泛表达于鼻咽癌组织，而且TrkB高表达与肿瘤体积、TNM分级和淋巴结转移密切相关，因此TrkB在促进肿瘤转移方面具有重要作用。　　目前尚未见关于TrkB在结肠癌淋巴结转移灶中表达情况的研究报道，也没有关于TrkB在淋巴结转移灶中的表达与肿瘤细胞凋亡关系的文献报道。本研究应用免疫组化方法检测30例结肠癌癌旁淋巴结转移灶中TrkB表达情况，并应用TUNEL染色方法检测细胞凋亡情况。结果显示TrkB蛋白在30例癌旁淋巴结转移灶中均有表达，其中22例为高表达(73.3％)，细胞凋亡率为6.9-23.5％。我们对TrkB高表达与结肠癌患者淋巴结转移范围之间的关系进行统计学分析发现，癌旁淋巴结以远淋巴结转移组TrkB高表达率为92.9％(13/14)，高于癌旁淋巴结转移组TrkB高表达率，两组间差异具有统计学意义。结果提示肿瘤细胞中TrkB表达越强，淋巴结转移越广泛。这提示我们TrkB与结肠癌的发展演进密切相关。有研究表明，TrkB具有保护细胞、抑制细胞凋亡的作用。因此我们进一步对癌旁淋巴结转移灶的肿瘤细胞中TrkB表达和细胞凋亡之间的关系进行统计学分析发现，TrkB高表达与细胞凋亡显著负相关。这提示我们，结肠癌中TrkB过表达可能通过抑制细胞凋亡，有助于肿瘤细胞在循环系统内存活，继而形成淋巴结转移灶并发生远隔转移。　　本研究观察到TrkB在结肠癌癌旁淋巴结转移灶中高表达，并与肿瘤细胞凋亡负相关，同时还发现结肠癌淋巴结转移范围越大，癌旁淋巴结中癌组织表达TrkB越强。这提示我们，TrkB可能在促进结肠癌淋巴结转移过程中起着重要作用。然而TrkB蛋白在结肠癌转移过程中的调节机制仍需要细胞水平上的研究。　　尽管已有大量关于TrkB在肿瘤中表达的研究，但是有关TrkB促进肿瘤发生演进的下游信号转导通路目前尚不太明确。有研究证实，活化的TrkB经PI3K信号通路保护神经母细胞瘤耐受化疗诱导的细胞凋亡，而且以Akt为靶点可以增强神经母细胞瘤对化疗的敏感性。我们的研究表明ERK信号通路可能参与TrkB促进结肠癌细胞侵袭过程。在本研究中我们发现，与低转移的结肠腺癌SW480细胞相比，高转移结肠腺癌SW620细胞中TrkB蛋白表达和ERK磷酸化水平较高。　　我们应用特异性TrkB-siRNA干扰SW620细胞中TrkB蛋白表达，观察SW620细胞增殖、凋亡和侵袭情况以及细胞内ERK磷酸化水平的变化。研究显示具有侵袭和转移性的肝癌细胞中TrkB的表达显著增强，TrkB能够增强卵巢癌细胞的增殖能力，使卵巢癌细胞耐受失巢凋亡。我们转染TrkB-siRNA后发现，SW620细胞中TrkB蛋白表达下调，同时细胞增殖受到抑制。我们又检测TrkB-siRNA作用SW620细胞前后，细胞凋亡情况的变化。结果表明阻断TrkB蛋白表达后，凋亡细胞数显著增加。Walch等人研究发现，TrkB的表达与前列腺癌的侵袭转移密切相关，因此我们进一步探讨下调TrkB表达对SW620细胞侵袭能力的影响，发现TrkB-siRNA能够显著抑制SW620细胞侵袭。同时，与对照组和转染non-silencing细胞相比，我们检测到随着TrkB表达水平降低，ERK磷酸化水平也显著降低。　　ERK调节细胞的增殖、分化和存活，是多种生长因子的下游效应蛋白。在多种人类肿瘤中都发现ERK的异常活化，ERK信号通路在肿瘤侵袭和转移过程中具有重要作用。我们进一步应用ERK特异性化学抑制剂，观察其对SW620细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。我们发现，与对照组细胞相比ERK抑制剂能够显著降低SW620细胞的侵袭能力，进一步表明ERK信号通路的活化与SW620细胞较强的侵袭能力相关，ERK信号通路可能在TrkB介导的SW620细胞侵袭过程中具有重要作用，因此ERK信号通路可能是阻断SW620细胞侵袭转移的重要靶点。同时我们还发现ERK特异性抑制剂对SW620细胞的增殖和凋亡没有影响，表明TrkB可能通过其他信号通路调控SW620细胞增殖和凋亡。然而，TrkB-ERK对细胞侵袭的调节机制还有待于进一步研究。　　综上所述，TrkB高表达与SW620细胞侵袭能力和ERK磷酸化水平相关，TrkB具有抑制细胞凋亡，促进细胞增殖和侵袭的作用。TrkB可能通过ERK信号通路的活化，促进SW620细胞侵袭转移。总而言之，我们的研究结果显示，TrkB对SW620细胞的促侵袭作用主要与ERK信号通路的活化相关。对TrkB的深入研究可能为临床阻断结肠癌侵袭转移提供新的治疗策略。　　结论:　　1.TrkB在结肠癌组织中过表达，与肿瘤淋巴结转移正相关。因此TrkB可能对结肠癌的发生发展具有促进作用。　　2.结肠癌癌旁淋巴结转移灶中TrkB过表达与细胞凋亡显著负相关，而且结肠癌癌旁淋巴结转移灶中细胞凋亡越显著，TrkB表达越低。因此TrkB可能对结肠癌细胞耐受凋亡并发生淋巴结转移具有促进作用。　　3.干扰TrkB蛋白表达能够降低高转移结肠腺癌SW620细胞内ERK磷酸化水平，促进细胞凋亡并抑制细胞增殖和侵袭。同时应用ERK特异性抑制剂也显著抑制细胞侵袭。因此ERK信号转导通路可能与TrkB介导的结肠腺癌细胞抗凋亡和侵袭能力的增加相关，沉默TrkB表达可能成为阻断结肠癌转移的新靶点。