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本文以桂枝、荆芥两味解表药挥发油为促透剂,考察其对马钱子中主要成分士的宁经小鼠和裸鼠皮肤的体外促透作用,筛选出最佳促透浓度。同时采用HP-B-CD对桂枝、荆芥挥发油进行包合,以提高其稳定性,同时比较两种挥发油包合前后对士的宁促透效果的改变。以下为主要研究内容:
1.挥发油的提取及主要成分的鉴别
采用水蒸气蒸馏法提取,以GC-MS鉴别其主要成分及含量。桂枝挥发油得率为0.4%,主要成分为:反-桂醛(69.86%),对甲基桂醛(2.18%),苯乙烯(1.98%);荆芥挥发油得率为为1%,主要成分为:长叶薄荷酮(58.86%),薄荷酮(21.92%),柠檬烯(3-28%)。
2.桂枝、荆芥挥发油体外促透实验研究
采用改良Franz扩散池进行体外透皮实验,以士的宁为模型药,1%、3%、5%、7%、10%浓度的桂枝、荆芥挥发油作为促透剂,氮酮为阳性对照,考察其对士的宁的体外促透作用并筛选最佳促渗浓度。采用HPLC测定透过液中士的宁的含量。结果在以小鼠皮肤为透皮屏障时,3%氮酮、3%桂枝挥发油、7%荆芥的促渗效果最好,它们对7mg∥mL士的宁的12小时平均累积渗透量(Q,2.μg/cm2)分别为:1710,1344.5,976.2。增渗倍数分别为:1.59,1.43,0.895;以裸鼠皮肤为透皮屏障时,Q12(μg/cm2)为:137.3、150.4、169.3,增渗倍数分别为:7.93、8.4、10.3。结果表明:3%桂枝挥发油能促进士的宁经小鼠与裸鼠皮肤的渗透,且经裸鼠皮肤的促渗作用有显著性意义(P<0.05)。7%荆芥挥发油能明显促进士的宁经裸鼠皮肤渗透(P<0.05),而经小鼠皮肤无明显促渗作用。
3.桂枝、荆芥挥发油HP-β-cD包合最佳工艺考察
选择HP-β-CD与挥发油的比例、包合时间、包合温度为主要影响因素,每个因素3个水平。采用L9(34)正交实验方法,以饱和水溶液法进行包合物的制备。以包合率和包合物含油率作为综合考察指标,选择最佳的包合工艺。并用DTA、TLC验证了包合物的形成。
3.1荆芥挥发油包合实验
实验结果表明:荆芥挥发油与HP-β-CD比例影响最显著,最佳工艺为A1B1C1,即油与HP-β-CD比例为1:10,即包合温度为30℃,包合时间为1h。挥发油包合率为83.64%,含油率为80.949μL.g-1。
3.2桂枝挥发油包合实验
结果表明:桂枝挥发油HP-β-CD包合物最佳工艺为A3B1C2,即油与HP-β-CD比例为1:10,包合温度为50℃,包合时间为3h。挥发油包合率为72.78%,含油率为70.44μLg-1。
4.桂枝、荆芥挥发油HP-β-CD包合物体外促透作用研究
以桂枝、荆芥挥发油包合物作为促透剂,以3%桂枝和7%荆芥挥发油、挥发油与HP-β-CD的物理混合物为对照,以裸鼠皮肤为透皮屏障,采用Franz扩散池进行透皮实验。
实验结果表明:3%桂枝、7%荆芥挥发油12小时平均累积渗透量Q12(μg/cm2)分别为:221.5、191.9,增渗倍数(ER)为:8.63、7.18。而空白供试液的Q12为24.1。桂枝、荆芥HP-β-CD包合物的Q12分别为:13.5、51.2,桂枝、荆芥与HP-β-CD物理混合物的Q12分别为:35.8、24.2,可见3%桂枝、7%荆芥挥发油有明显的促透皮作用,但将二者的挥发油制成包合物后,其促透作用明显减弱。