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目的:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种慢性进行性自身免疫性疾病,以对称性、侵蚀性关节滑膜炎为主要特征,病变呈持续性、反复发作过程。病情逐渐发展可引起多系统受累并最终导致骨和软骨的破坏及关节功能障碍。RA的病因及发病机制至今尚未完全阐明,但是大量研究证实:多种免疫活性细胞的活化,细胞因子、炎症介质的共同参与,滑膜细胞增殖与凋亡的不平衡及血管翳的形成是造成疾病发生发展的重要原因。目前,对于RA的治疗,国内外尚无理想药物。传统抗风湿药物毒副作用较大,疗效差且疗程长,而生物制剂价格昂贵,还不能被普遍应用。因此,寻找一种新的治疗药物或治疗方法尤为重要。最新研究表明滑膜细胞的增殖凋亡不平衡在类风湿关节炎的发生及发展过程中具有相当重要的地位,并可能成为类风湿治疗的新靶点。依达拉奉(edaravone)作为临床上唯一一种自由基清除剂能有效清除自由基物质,近来研究发现其除了具有明确清除自由基的作用之外,还发挥着其它多方面效用,包括降低NF-κB活性和调节凋亡等作用,有日本学者发现它能够缓解RA患者的关节炎症状,但国内尚无用其治疗RA的报道。由Ⅱ型胶原所诱导的胶原性关节炎大鼠(collagen-induced arthritis, CIA)模型被认为具有与RA相似的关节炎变化,本实验即以胶原性关节炎大鼠模型为基础,从关节肿胀度、关节滑膜组织细胞凋亡情况及NF-κB、凋亡相关基因Fas、FasL在CIA大鼠关节滑膜中的表达水平几个方面,观察依达拉奉对CIA的影响,评价其疗效,探讨依达拉奉与NF-κB、滑膜细胞凋亡及其相关基因Fas、FasL四者之间的相关性及依达拉奉治疗RA的机制和临床应用价值。方法:(1)选用30只成年雄性Wistar大鼠,随机分成5组,每组6只,分别命名为Ⅰ～Ⅴ组,其中Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ组为模型对照组,Ⅲ组为依达拉奉低剂量组,Ⅳ组为依达拉奉高剂量组,Ⅴ组为氯诺昔康组。Ⅱ～Ⅴ组每只大鼠给予尾根部皮内注射胶原(CFA)0.1ml制作CIA模型。(2)于造模致炎后第18天开始Ⅲ～Ⅳ组分别给予依达拉奉3.0 mg/kg 2/d、6.0 mg/kg 2/d腹腔注射治疗,Ⅴ组给予氯诺昔康4.0mg/kg 1/d腹腔注射治疗。(3)注射后连续观察大鼠的一般情况及关节炎症表现,用游标卡尺测定不同时间点各组大鼠的右足垫厚度,并进行关节炎指数(AI)评定。(4)各组大鼠于第28天采血处死后取大鼠双膝关节滑膜组织,4﹪多聚甲醛固定,石蜡包埋,行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察关节滑膜衬里层细胞(LCC)增生,衬里下层炎细胞浸润及血管翳形成等病理变化。(5)对大鼠滑膜组织进行流式细胞学检测其细胞凋亡率及Fas,FasL表达水平。(6)NF-κB的SP免疫组织化学染色,采用真彩色病理图像分析系统进行定量分析。(7)应用SPSS13.0统计软件进行统计分析。结果:(1)关节炎指数(AI):第Ⅱ组大鼠造模后各时间点的AI均高于第Ⅰ组(P<0.01),造模后18天开始比第15天显著升高(P<0.01),但高峰出现在造模后21天;Ⅲ～Ⅴ组造模后18天开始比第15天显著升高(P<0.05),高峰出现在造模后18天,Ⅲ～Ⅴ组间AI无统计学差异(P>0.05)。(2)右足垫厚度:各组大鼠免疫后12天之内右足垫厚度与第Ⅰ组相比无统计学差异,Ⅱ～Ⅴ组于免疫后第15天右足垫厚度高于Ⅰ组(P<0.05)其中Ⅱ组于18、21天达到高峰,之后有所下降(P<0.01),Ⅲ～Ⅴ组高峰出现在18、21天,第21天开始Ⅲ～Ⅴ组右足垫厚度开始有所下降,21～27天Ⅲ～Ⅴ组右足垫厚度明显低于Ⅱ组(P<0.05),但Ⅲ～Ⅴ三组之间无统计学差异。(3)滑膜组织细胞凋亡率:Ⅱ组大鼠造模后第28天滑膜组织细胞凋亡率与Ⅰ组(正常对照组)相比不具有统计学意义(P>0.05)。Ⅲ～Ⅴ组大鼠造模后第28天滑膜组织细胞凋亡率明显高于第Ⅰ组(P<0.01)及第Ⅱ组(P<0.01),但Ⅲ～Ⅴ三组之间无统计学差异(P>0.05)。(4)滑膜NF-κB的积分光密度(IOD)值:Ⅱ组大鼠显著高于Ⅰ组,有统计学差异(P<0.01);Ⅲ～Ⅴ组NF-κB的IOD值在造模后28天明显低于Ⅱ组,具有统计学差异(P<0.01),但Ⅲ～Ⅴ组三者相比没有统计学差异(P>0.05),Ⅲ～Ⅴ组NF-κB的IOD值高于Ⅰ组并具有统计学差异(P<0.05)。(5)滑膜组织Fas表达:Ⅱ组大鼠造模后第28天滑膜组织Fas表达高于Ⅰ组(正常对照组) (P<0.01)。Ⅲ～Ⅴ组大鼠造模后第28天滑膜组织Fas表达高于Ⅰ组(P<0.01)及Ⅱ组(P<0.05),但Ⅲ～Ⅴ三组之间滑膜组织Fas表达无统计学差异(P>0.05)。(6)滑膜组织FasL表达:Ⅱ组大鼠造模后第28天滑膜组织FasL表达低于Ⅰ组(正常对照组)并具有统计学意义(P<0.01)。Ⅲ～Ⅴ组大鼠造模后第28天滑膜组织FasL表达均高于Ⅰ组(P<0.01)及Ⅱ组(P<0.01),但Ⅲ～Ⅴ三组之间滑膜组织FasL表达无统计学差异(P>0.05)。(7)相关性分析:AI与右足垫厚度之间呈直线正相关;滑膜细胞凋亡率与AI之间呈负相关,滑膜组织FasL表达与凋亡率呈正相关;滑膜组织NF-κB的IOD值与右足垫厚度及AI值呈直线正相关,且三者之间分别呈正相关。结论:(1)依达拉奉对CIA大鼠有明显的抗炎作用,能够降低CIA大鼠的关节炎指数,减轻右足垫厚度。(2)依达拉奉能减轻滑膜组织肿胀,减少膝关节滑膜衬里层的增生,提示依达拉奉可能能延缓CIA大鼠病程进展。(3)依达拉奉高剂量组对CIA大鼠的治疗作用不高于低剂量组,提示依达拉奉的治疗效果剂量依赖性不明显。(4)依达拉奉能明显增加CIA大鼠滑膜组织凋亡细胞数,并上调滑膜组织中Fas、FasL的表达(5)依达拉奉在抑制CIA大鼠的关节炎症、增加滑膜细胞凋亡率和减少滑膜NF-κB的表达方面与氯诺昔康相当。