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第一部分重组人角质细胞生长因子2对大鼠机械通气所致肺损伤的保护作用目的本实验通过建立大鼠机械通气肺损伤模型,旨在研究重组人角质细胞生长因子-2对机械通气所致肺损伤的保护作用。方法实验选用SPF级雄性SD大鼠40只,随机分成四组：Control组为正常对照组：大鼠仅行气管插管,不行机械通气；LV组为小潮气量机械通气组(参数设置：潮气量=6ml/kg,RR=70次／分,PEEP=3cmH20,Fi02=21％)；VILI组为大潮气量机械通气即机械通气肺损伤组(参数设置：潮气量=20ml/kg,RR=70次／分,PEEP=0cmH2O,Fi02=21％)；rhKGF-2+VILI组为机械通气肺损伤+rhKGF-2预先给药治疗组(rhKGF-2按5mg/Kg经气管内滴注给药,给药72小时后再行大潮气量机械通气,参数同VILI组)。所有动物在机械通气4小时后放血处死,收集标本,行动脉血气分析,并检测肺湿干比(W/D),行支气管肺泡灌洗,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白浓度,BALF中有核细胞总数及中性粒细胞计数,观察光镜(HE染色)及电镜下肺组织病理改变并行肺损伤评分。结果机械通气4小时后VILI组Pa02(mmHg)与Control组及LV组相比均明显降低(p<0.05),而rhKGF-2+VILI组Pa02较VILI组明显升高(p<0.05),LV组PaO2与Control组相比差异无统计学意义(P>0.05)。VILI组肺W/D、肺损伤评分、BALF中有核细胞总数及中性粒细胞计数(×105/m1)及BALF中蛋白浓度(ug/ml)与Control组及LV组相比均明显升高(p<0.05),rhKGF-2+VILI组上述指标均较VILI组明显降低(p<0.05),LV组上述指标与Control组相比差异无统计学意义(P>0.05)。VILI组光镜下可见肺泡间隔增厚,有较多炎症细胞浸润,肺泡腔内可见大量水肿液并有红细胞和中性粒细胞渗出；电镜下可见肺上皮细胞严重破坏、基底膜破损间断、肺泡-毛细血管屏障断裂不连续。而rhKGF-2+VILI组肺组织损伤程度较VILI组明显减轻。LV组肺组织病理变化与Control组无明显差别。结论1.健康大鼠接受20ml/kg潮气量通气4h可出现机械通气肺损伤。2.机械通气前72小时给予5mg/kg重组人角质细胞生长因子-2气道内滴注给药可以有效减轻机械通气对肺组织的损伤程度,起到较好的保护作用。第二部分重组人角质细胞生长因子2对大鼠机械通气所致肺损伤的保护机制研究目的本实验通过研究rhKGF-2对VILI大鼠肺组织MPO活性、BALF中炎症因子、肺泡Ⅱ型上皮细胞数目及表面活性物质蛋白的影响,旨在探讨rhKGF-2对大鼠机械通气所致肺损伤可能的保护机制。方法实验选用SPF级雄性SD大鼠40只,随机分成四组：Control组为正常对照组(大鼠仅行气管插管,不行机械通气),rhKGF-2组为单纯rhKGF-2给药组(rhKGF-2按5mg/Kg经气管内滴注给药,给药72小时后行气管插管,不行机械通气),VILI组为机械通气肺损伤组(参数设置：Fi02=21%,VT=20ml/kg,PEEP=0cmH2O,RR=70次／分),rhKGF-2+VILI组为机械通气肺损伤+rhKGF-2预先给药治疗组(rhKGF-2按5mg/Kg经气管内滴注给药,给药72小时后再行大潮气量机械通气,参数同VILI组)。所有动物在机械通气4小时后经颈动脉放血处死,检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,ELISA法测定肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α及MIP-2的含量,Realtime PCR检测肺组织SP-A、SP-B、SP-C mRNA水平,Western blot法测定肺组织中表面活性蛋白C(SP-C)水平,SP-C免疫组化染色检测肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖情况。结果VILI组肺组织MPO活性、BALF中TNF-α及MIP-2的含量均较Control组明显增高(p<0.05),而rhKGF-2+VILI组MPO活性、BALF中TNF-α及MIP-2的含量均较VILI组明显降低(p<0.05),rhKGF-2组上述指标与Control组相比差异无统计学意义(P>0.05)；VILI组肺组织SP-A、SP-B、SP-C mRNA水平,表面活性蛋白C(SP-C)水平及肺泡上皮细胞SP-C标记指数均较Control组明显降低(p<0.05),而rhKGF-2+VILI组肺组织SP-A、SP-B、SP-C mRNA水平,SP-C蛋白水平及肺泡上皮细胞SPC标记指数均较VILI组明显升高(p<0.05),rhKGF-2组上述指标与Control组相比也明显升高(p<0.05)。结论重组人角质细胞生长因子-2可能是通过抑制炎症因子的表达,减轻中性粒细胞在肺部的浸润和活化,通过促进肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖及肺泡表面活性物质蛋白的表达从而减轻机械通气所致肺损伤。