孕激素受体ser294磷酸化对卵巢癌细胞的增殖和凋亡的影响

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目的:探讨孕激素对卵巢癌细胞孕激素受体Ser294磷酸化状态的影响以及孕激素受体Ser294磷酸化对卵巢癌细胞的增殖和凋亡的影响。方法:(1)将卵巢癌HO8910(PR高表达)和SKOV3(PR低表达)细胞分为四组:R5020组、R5020+U0126组、U0126组和对照组。R5020组于起始时加入不含药物培养基,6h、18h、30h、42h更换为终浓度为10-6mol/L R5020的培养基,12h、24h、36h更换为不含药物的培养基。R5020+U0126组起始加入终浓度为10-5mol/L U0126的培养基,6h、18h、30h、42h更换为终浓度为10-6mol/L R5020的培养基,12h、24h、36h更换为终浓度为10-5mol/L U0126的完全培养基。U0126组加入终浓度为10-5mol/L U0126的培养基。对照组加不含药物的完全培养基,以上四组均于48h收获细胞,应用Western-Blot检测分别各组细胞PRA Ser294和PRB Ser294磷酸化相对表达,由于PR各亚型中仅有PRA Ser294和PRB Ser294会发生磷酸化,所以我们用PRA Ser294和PRB Ser294磷酸化的变化趋势来表示PR Ser294磷酸化的变化趋势。(2)实验分组同上,应用CCK8法和Annexin V/PI双染法流式细胞技术检测各组细胞的增殖抑制率和凋亡率。结果:(1)空白对照组SKOV3和HO8910细胞系PRB Ser294磷酸化相对表达量分别为(0.006±0.002、0.007±0.002);PRA Ser294不发生磷酸化,U0126组SKOV3和HO8910细胞系PRB Ser294磷酸化相对表达量分别为(0.005±0.001、0.006±0.001);PRA Ser294均不发生磷酸化,R5020组SKOV3和HO8910细胞系PRB Ser294磷酸化相对表达量分别为(0.72±0.028、0.68±0.045);PRA Ser294磷酸化相对表达量分别为(0.18±0.027、0.19±0.028),R5020+U0126组SKOV3和HO8910细胞系PRB Ser294磷酸化相对表达量分别为(0.52±0.033、0.37±0.012);HO8910细胞系PRA Ser294磷酸化相对表达量分别为(0.14±0.016);SKOV3细胞PRA Ser294不发生磷酸化。R5020组两株细胞PRA Ser294和PRB Ser294磷酸化相对表达均高于对照组,R5020+U0126组PRA Ser294和PRB Ser294磷酸化相对表达均低于R5020组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)U0126组SKOV3和HO8910细胞系增殖抑制率分别为(9.27%、28.22%),R5020组SKOV3和HO8910细胞系增殖抑制率分别为(40.36%、53.15%),R5020+U0126组SKOV3和HO8910细胞系增殖抑制率分别为(29.65%、38.66%)。R5020组两株细胞的增殖抑制率均高于R5020+U0126组,R5020+U0126组两株细胞的增殖抑制率均高于U0126组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)对照组SKOV3和HO8910细胞系凋亡率分别为(9.79%、9.57%),U0126组SKOV3和HO8910细胞系凋亡率分别为(12.37%、12.62%),R5020组SKOV3和HO8910细胞系凋亡率分别为(21.66%、27.82%),R5020+U0126组SKOV3和HO8910细胞系凋亡分别为(15.35%、14.11%)。R5020组两株细胞凋亡率均高于对照组和R5020+U0126组,R5020+U0126组凋亡率均高于U0126组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:孕激素可使卵巢癌HO8910和SKOV3细胞中PR Ser294磷酸化相对表达增加。卵巢癌SKOV3和HO8910细胞系PR Ser294磷酸化增加后,孕激素抑制卵巢癌细胞系增殖和促凋亡作用增强。
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