近年来,我国多地鸭养殖场出现了以心包积液和出血性肝炎为主要特征的鸭腺病毒感染疫情,经诊断为鸭腺病毒3型（Duck adenovirus type3,DAd V-3）感染,其发病率40%～55%,对鸭养殖业造成重大损失。本研究采集江苏泰州某麻鸭养殖场出现心包积液和肝炎症状的麻鸭肝脏进行病毒分离和鉴定,结果成功分离出1株DAd V-3;病毒经纯化后,进行了致病性研究和病毒全基因组测序分析;通过原核表达DAd V-3 Fiber-2蛋白,制备了抗Fiber-2单克隆抗体。1、将病料肝脏研磨加入双抗,接种长满单层的鸡肝癌细胞（Chicken hepatocellular carcinoma cell line,LMH）,待出现细胞病变,对细胞上清提取核酸,经PCR鉴定和核酸测序分析,确定为DAd V-3,命名为TZ193（Gen Bank登录号:MT934842）。2、为比较分离株与经典毒株的基因序列差异,对分离株TZ193进行了全基因组测序,结果发现其全长43842bp,G+C含量为47.16%,确定为DAd V-3新型变异株。全基因序列的遗传进化树显示:TZ193毒株和DAd V-3 CH-GD-12-2014毒株在同一分支。与CH-GD-12-2014毒株相比,TZ193毒株在ORF67基因处出现点突变,导致该基因提前终止,这说明DAd V-3 TZ193毒株已经发生变异。3、为快速准确地检测DAd V-3,建立了Taq Man荧光定量聚合酶链式反应（Taq Man probe quantitative polymerase chain reaction,q PCR）方法。该方法线性回归方程为:y=-3.3895x+42.668,R2=0.9958;检测最低浓度为45.96个拷贝数/μL;重复试验变异系数为0.29%～1.20%;与常见家禽病原无交叉反应。4、病毒经纯化后进行动物回归实验,用1.58×10~6TCID50/m L病毒液肌肉接种10只1日龄麻鸭,接种4天后全部死亡,致死率达到100%。剖检可见肝脏出血,心包积液等症状。组织切片可见:心肌纤维变性、肝细胞坏死等病理变化;q PCR方法检测发现:各组织脏器中均有病毒分布,其中以盲肠病毒含量最高,达到8.4×10~5拷贝数/μL,其次是十二指肠、肝脏和心脏,大脑含量最低。5、为进一步研究其免疫原性,通过原核表达DAd V-3 Fiber-2蛋白,并制备其单克隆抗体。首先通过PCR扩增fiber-2基因,构建p ET32a-DAd V3-fiber2原核质粒,表达蛋白纯化后免疫小鼠,使用杂交瘤技术制备单克隆抗体,筛出阳性细胞株制备腹水,经间接免疫荧光检测可见细胞中存在特异性荧光,Western blot鉴定发现在约59k Da处出现特异性条带。综上,本研究分离到一株鸭源腺病毒,经鉴定为DAd V-3;全基因组测序分析确定为DAd V-3新型变异株;建立了针对DAd V-3的Taq Man荧光定量PCR检测方法;制备了抗Fiber-2的单克隆抗体。这些为深入了解DAd V-3的进化过程、致病机理以及制备DAd V-3亚单位疫苗的抗原选择奠定了基础。