羊口疮,又名羊传染性脓疱病(Contagious Ecthyma),是痘病毒科(Poxviridae)副痘病毒属(Parapoxvirus)中的羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)所引起的一种接触传染性疾病。使用DNAstar软件中Protean功能对GenBank上发表的羊口疮病毒表面囊膜蛋白B2L基因序列进行分析,将B2L基因全长命名为B2L-1,筛选出高度亲水的优势表位区命名为B2L-2。对B2L-1、B2L-2编码基因进行大肠杆菌偏爱性密码子优化,通过基因合成手段,将His-tag及B2L-1、B2L-2基因分别连接到pET32a(+)载体上,构建成原核表达载体,转化至BL21(DE3)感受态细胞中,进行原核表达,并优化了表达条件,后通过Ni-NTAAgarose亲和纯化柱进行纯化。将B2L-1、B2L-2蛋白分别免疫羔羊,以获得阳性血清,并将纯化的重组融合蛋白用作包被抗原,建立检测羊口疮病毒抗体的间接ELISA方法,优化了 ELISA条件。SDS-PAGE结果表明,成功获得了具有良好可溶性和高表达效率的重组融合蛋白B2L-1和截短的B2L-2蛋白;Western Bolt结果显示B2L-1和B2L-2蛋白可特异性结合Anti-His Mouse mAb;琼脂扩散实验结果表明,表达的产物可以与羊口疮病毒免疫的兔血清反应,表明B2L-1和B2L-2蛋白具有良好的反应原性;建立的ELISA方法最佳条件为B2L-1:包被量为55ng/mL,血清最佳稀释度为1:200;最佳包被物为5%脱脂乳;二抗最佳稀释度为1:5000;最佳显色时间为20min;B2L-2:包被量为56.5ng/mL,血清最佳稀释度为1:400;最佳包被物为5%脱脂乳;二抗最佳稀释度为1:5000;最佳显色时间为20min。对采自内蒙古的40份羊血清进行检测,与40份血清的中和试验结果比较,结果表明间接ELISA检测方法的检出阳性率与中和试验结果符合率分别为100%和97.5%。所建立的检测羊口疮病毒抗体的间接ELISA检测方法有望为羊口疮的检测提供快速、简便的手段。