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目的:基于衰老相关基因p16INK4a、p53、p21,探讨补肾化瘀生新方延缓骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）衰老的机制;方法:取60只SPF级SD大鼠,采用随机数字表法分为补肾化瘀生新方组和生理盐水组,用于含药血清的制备;SPF级SD大鼠,3周龄,进行原代BMSCs的提取,取状态良好的第3代BMSCs,用6g/L D-gal诱导建立BMSCs衰老模型;分组:正常组随机分为空白组、空白中药组、空白生理盐水组,衰老组随机分为模型组、模型中药组、模型生理盐水组。观察各组各代BMSCs的形态学变化;MTT法确定促进第3代BMSCs分化增殖的最佳含药血清的浓度;实时荧光定量PCR技术检测不同代次各组BMSCs p16INK4a、p53、p21 mRNA的表达。结果:（1）镜下见年轻的BMSCs形态呈长梭形或纺锤形,漩涡样分布,生长迅速,折光性好;衰老的BMSCs多呈扁三角形、椭圆形,胞体扩散,生长缓慢,折光性差;（2）根据MTT法检测结果可知,促进BMSCs增殖的最佳浓度为10%;（3）实时荧光定量PCR结果显示:第3代BMSCs,空白组、模型组、模型中药组、模型生理盐水组之间相互比较,p16INK4a、p53、p21 mRNA表达量均无统计学意义（P>0.05）;第6代BMSCs,与空白组相比,模型组、模型生理盐水组、空白生理盐水组的三个衰老关键基因p16INK4a、p53、p21 mRNA的表达差异具统计学意义（P<0.05）,空白中药组、模型中药组的表达差异无显著性（P>0.05）;与模型组相比,模型中药组的表达差异具有显著性统计学意义（P<0.01）,模型生理盐水组的表达无统计学意义（P>0.05）;且模型中药组与模型生理盐水组、空白中药组与空白生理盐水组相比,p16INK4a、p53、p21 mRNA的表达差异均具有统计学意义（P<0.05）。第7代BMSCs,与空白组相比,空白中药组p16INK4a、p53、p21 mRNA的表达差异无统计学意义（P>0.05）,余四个组的表达差异均具统计学意义（P<0.05）;与模型组相比,模型中药组的三个基因的表达具有统计学意义（P<0.05）,模型生理盐水组的表达无统计学意义（P>0.05）;模型中药组与模型生理盐水组、空白中药组与空白生理盐水组相比,差异均具有统计学意义（P<0.05）。第9代BMSCs,与空白组相比,空白中药组p16INK4a、p53、p21 mRNA的表达量差异无统计学意义（P>0.05）,余四个组的表达量差异均具有显著性（P<0.01）;与模型组相比,模型中药组p16INK4a mRNA的表达量无统计学意义（P>0.05）,p53、p21 mRNA的表达量差异有统计学意义（P<0.05）,而模型生理盐水组三个基因mRNA的表达量差异均无统计学意义（P>0.05）;与空白中药组相比,空白生理盐水组三个基因mRNA的表达均具有统计学意义（P<0.05）;与模型中药组相比,模型生理盐水组p16INK4a mRNA的表达不具有统计学意义（P>0.05）,模型生理盐水组p53、p21 mRNA的表达量差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论:（1）在自然衰老及成功诱导衰老模型的条件下,补肾化瘀生新方可延缓BMSCs的衰老,但对年轻的BMSCs作用不明显;（2）补肾化瘀生新方可通过下调衰老关键基因p16INK4a、p53、p21的表达来延缓BMSCs的衰老,但随着衰老时间的延长,其作用力逐渐减弱,并且到一定程度,这种衰老具有不可逆性;（3）补肾化瘀生新方调控BMSCs的衰老与其抑制p16/pRb和p53/p21途径密切相关。