基于Ser-SELEX技术的结肠癌血清适配体的筛选及其应用研究

来源 :燕山大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:why7981
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是一种常见的胃肠道恶性肿瘤,在癌症相关死亡的病因中排名第二,全球范围内每年有近两百万人成为确诊的结直肠癌患者。据2018年统计,我国结直肠癌的发病率居于第3位,且多数病人在确诊时已经接近晚期。由于结肠癌是早期不易检测,晚期手术也极易转移的癌症种类,开发合理的早期确诊手段成为治疗结肠癌的新思路。核酸适配体由人工体外合成的寡核苷酸片段,利用指数富集配体系统进化技术(即SELEX技术)从随机的寡核苷酸库池中筛选获得。核酸适配体可以通过其特殊的三维构象与目标分子特异性结合,作为具有高特异性和性质稳定的识别性小分子,在癌症早期检测中具有重要的发展前景。在本研究中,采用基于琼脂糖磁珠的筛选(Serum-SELEX)技术筛选了结肠癌血清的特异性适配体。为了获得高特异性的适配体,我们通过前期结肠癌血清正筛-正常人血清反筛步骤和后期结肠癌血清正筛-其他癌症血清反筛步骤循环的方式,经过16轮的筛选流程,完成后进行高通量测序。通过序列分析、碱基分布情况、二级结构和三级结构模拟,共选取4条候选适配体进行特性分析。通过对适配体序列的分析,胸腺嘧啶为适配体占比最高的主要碱基,其次是鸟嘌呤。这两者在大部分候选适配体中占据了随机序列域中约60%的比例。通过他们的二级结构预测可发现,候选适配体主要形成的结构是茎环和假结两种,这可能是适配体与血清中蛋白分子结合的优势结构域。通过进一步对候选适配体的三维结构进行模拟并用圆二色谱进行验证。候选适配体的亲和力使用q-PCR法验证,亲和力常数Kd均在10n M范围内,这表明了适配体具有优秀的亲和力。利用磁珠偶联法鉴定适配体与血清中蛋白分子的特异性情况,发现候选适配体APT-2具有良好的特异性,且此种方法的检出率为82.5%左右。进行ELASA试验对特异性结果进一步确认,验证了适配体APT-2的优异特异性。本研究最终筛选得到了结肠癌血清的特异性核酸适配体APT-2,并与结肠癌血清有适宜的亲和力(6.122nM)和优秀的特异性,表明该适配体在结肠癌的早期诊断手段上有着良好的前景。
其他文献
随着高容量RE-Mg-Ni合金的出现,研究者发现其特殊的超堆垛结构使合金表现出优异的电化学性能,作为镍氢电池新一代负极材料具有良好的应用前景。近年来,研究热点主要集中在高容量AB3型和A2B7型储氢合金,对于A5B19构型合金研究颇少。而A5B19型储氢合金在循环稳定性和高倍率放电方面表现突出,但目前关于A5B19型储氢合金相结构的制备和生成机制、以及特定元素对合金性能的影响机理尚不清楚。因此,探
学位
近年来,文博考古工作获得广泛重视。国务院及国家文物局继《国家文物事业发展“十三五”规划》如期完成后,制定了《“十四五”文物保护和科技创新规划》。首次将科技创新与文博领域共相结合讨论,提出建设国家文物资源大数据库的具体要求。推荐文物影像信息的高清数据采集和展示利用,建立文物数字化规范标准体系。而基于图像搜索的文物图像数据分类技术则是完成规划的重要组成部分。虽然以往对文物图像数据分类研究上偶有提及,但
学位
干旱灾害是指土壤水分和作物需水不平衡而产生的作物减产现象,是直接影响作物产量、影响范围较广、影响时间较久、发生次数较为频繁的气象灾害,对农业的影响尤为显著。近年来,随着全球气候变暖和极端气候事件的加剧,导致干旱灾害发生频率、强度、范围和持续时间均呈现增加态势。再加上辽宁省作为我国重要的粮食生产基地,其主要种植作物为玉米,玉米产量的波动将直接影响到辽宁省粮食生产安全。因此,进行辽宁省干旱灾害风险评价
学位
<正>习近平总书记在党的二十大报告中指出,党的十八大以来,我们党勇于进行理论探索和创新,取得重大理论创新成果,集中体现为新时代中国特色社会主义思想;强调党的十九大、十九届六中全会提出的“十个明确”“十四个坚持”“十三个方面成就”概括了这一思想的主要内容,必须长期坚持并不断丰富发展。学懂弄通做实习近平新时代中国特色社会主义思想,首先应对其主要内容准确把握、理解到位。
期刊
肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤,死亡率居恶性肿瘤之首,早期诊断和治疗是提高肺癌5年生存率的关键。早期肺癌一般没有明显的症状和指针,目前肺癌常用诊断方法是肿瘤标志物检测,但现有肺癌肿瘤标志物特异性和检出率较低,临床急需发现新的肺癌标志物,开发一种新的诊断方法。核酸适配体作为一种新型生物分子探针,它能够形成特定的三维空间结构与靶标分子进行结构匹配。此外,与抗体相比,它具有分子量小、成本低、易合成等优点,
学位
处于河海交汇的河口地区是孕育不同来源有机质的优良场所,也是探讨有机质产生,运移和转化机制的理想地带。C/N和δ13C是被广泛采用的用来研讨有机碳来源的重要指标,正构烷烃作为稳定性极强的生物标志物,也是指示有机质来源的良好标志物。本文以小河流域庄河河口为研究区,分别在河口汇合处,河流东西侧不同方位进行样品采集,并根据表层沉积物粒度,总有机碳(TOC)和总氮(TN)的数值来研究表层沉积物中有机质的分布
学位
碧流河口位于122°18’E~122°54’E、39°28’N~40°21’N之间,是辽东半岛重要的入海河流,河口区域发育了广阔的潮间带,蕴含着丰富的沉积信息。为了对碧流河口潮间带的沉积特征、沉积机制和物质来源等进行深入研究,本文选取9个断面共27处表层沉积物样品,通过测定沉积物粒度、常量元素、微量元素、有机元素等指标,结合多元统计方法,揭示了碧流河口表层沉积物粒度及地球化学特征,讨论其沉积过程中
学位
在全球干旱问题日益凸显背景下,研究区域干旱演变及农业灾损对促进粮食稳产高产以及制定农业防旱减灾对策意义重大。本研究以辽宁省为研究区域,通过分析区域干旱灾害演化过程与局地极端气候、大尺度气候系统变化特征来揭示干旱-气候的内在联系,辨识干旱事件发生的气候影响因素;同时基于土壤-作物-大气连续体系统,融合气象站点、遥感多源数据,分析植被、土壤、降水、气温等多源旱情相关信息,应用熵权法构建基于标准化降水蒸
学位
生态产品价值核算对于定量研究生态系统给予人类贡献具有重要意义,也是助力“两山”价值转换的重要工具。生态产品主要包括物质产品、调节服务及文化服务,物质产品及文化服务可通过市场交易实现价值转化,调节服务价值占比较大但其价值转化能力较差。为助力三明市生态产品价值实现,建立合适的评估体系,利用传统价值量的评估方法进行生态产品价值核算,同时通过主成分分析法将服务功能分区与区(县)进行适应性划分。结果表明:三
期刊
<正>学原文坚持党对一切工作的领导。党政军民学,东西南北中,党是领导一切的。必须增强政治意识、大局意识、核心意识、看齐意识,自觉维护党中央权威和集中统一领导,自觉在思想上政治上行动上同党中央保持高度一致,完善坚持党的领导的体制机制,坚持稳中求进工作总基调,统筹推进“五位一体”总体布局,协调推进“四个全面”战略布局,提高党把方向、谋大局、定政策、促改革的能力和定力,确保党始终总揽全局、协调各方。
期刊