血吸虫病是严重危害人类、牲畜健康的寄生虫病。虽然采取大规模人畜同步化疗及易感地带灭螺等措施后，血防工作取得了重大成绩，但由于再感染及反复化疗费用等问题，免疫预防血吸虫病已成为当今研究工作的重点。DNA疫苗（或称核酸疫苗）是90年代新发展起来的疫苗，具有易于制备和纯化，化学和生物学性质稳定，不需冷藏，便于保存和运输，来源不受限制，作用时间长，目的抗原在细胞内表达，类似于天然抗原，可诱发细胞毒淋巴细胞应答并同时刺激抗体的产生等优点。本研究利用水牛对日本血吸虫有一定自然抵抗力这一特性，免疫筛选出日本血吸虫新的抗原分子，并构建成DNA疫苗，与本室已构建的DNA疫苗均进行免疫保护性评价及机理探讨。 一、新的日本血吸虫DNA疫苗及重组蛋白疫苗的筛选、构建、保护效果及机理研究 （一）水牛感染血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 感染日本血-吸虫（Schistosoma japonicum,Sj）的水牛（Bubalus bubaiis，Bb or Buffalo）是我国湖沼型疫区血吸虫病的主要传染源，已证明对感染有相对抵抗力，主要表现在感染率及感染度低，自然感染水牛排卵期较其他易感动物短，是对日本血吸虫有一定自然抵抗力的动物。为寻找有效的日本血吸虫疫苗候选分子，本研究用感染水牛血清为探针，对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选。三轮筛选后，将7个阳性克隆经辅助噬菌体自动剪切并PCR扩增显示，插入的Sj cDNA片段大小在0.8kb至2kb之间，选取其中4个经DNA测序分析，发现2个未曾报道过的Sj新基因，分别命名为Sj-IB1和Sj-Rho GTPase，并在GeneBank上登记注册。结果说明Bb感染血清可识别Sj的一些特殊抗原分子，这些抗原分子的免疫保护作用值得进一步研究。 （二）日本血吸虫Rho GTPase DNA疫苗及重组蛋白疫苗的构建和免疫保护效果研究 将以日本血吸虫感染水牛血清筛选Sj成虫cDNA文库所获得的新基因Sj-Rho GTPase（登录号为AF521619）分别克隆至真核表达载体pcDNA3.1和原核表达载体pGEX-5X-3中，构建成DNA疫苗及重组蛋白疫砧，才采用KR、双附切、钓序、＊＊＊CE、仇疫印记法等方法对其5 刁 鉴定、分析，1 二卫“ ＊。大上班 地纯化丫IVI〕A )！1伍和大员表达的融合压臼分别成联合免疫动物，以测定该分丁n化疫伙①’效爪。乡uZ表明可 两牙。疫歹 均d 荆托功多 与刘照组相比多DM疫历丸重组蛋白疫伯 及联 合疫市分爿砍六18．U％、22．＊％和＊．20旷fiU虫率以及20．07％、34．55％和 49．55％的b成卵率，说明u－Rho GTPase DNA IR苗及市11蛋 E］疫苗N“诱导小鼠产生一定的免疫保护作川，DNA )R苗初RI【l－亚组蛋白疫苗加强的联合免疫方案保护效果哭好于单一疫苗。 （三）11 小叮led吸虫附；＊＊厂；；＊＊＊八疫 茁及工圭蛋臼疫 茹的 促书抖o11＊‘究 将Sj－RI们G＊h驼DNA疫休及重组蛋白疫茁分别及联合免疫动物后多5不问问们，，J、飞爿井伽－沽汐以E工SA法现定总抗体效价及工g 业纤多初步株 i 厂木山吸虫。午呕I人1＼；＊爿Sj－＊。＊卜。se＊A疫功及亚组蛋臼疫俏的业疫促护机制。结贝发现：重组蛋白疫苗及联合疫苗诱导产生的抗仲效价较高，DNA疫苗及联合疫苗诱导产生的抗体以k GZa为主，主要诱生Till型细胞免疫应各，重组蛋白疫苗诱导产生的抗体以比GI为主，主要诱生TIZ型体液兔疫应答。二、日木血吸虫红织强白腑B及天冬酞硼洲A疫苗 囱进一步刃究 十一) 日爿刑＿吸虫复合ON八疫方的组织表达及功疫促了 效议研 究 为了灿本主所闪拴＊本上 吸虫火陆 株二价h汛疫砍S＊ ＊CST和幻钴｛引’才 免疫｛l’效果，将“只昆＊ 小鼠分为5组，两个＊照纵们小卜～别于川 凹头肌泞为二划u欠水和空析粒W＜1＊二，三个实验织n小鼠则问法分别注射 SjGST、S尸卜GST和 Sj32－GST，每卜 3 W免疫1O，〕仇疫3沙，锐3次免疫后光14 d，均勾亢召W只小鼠，以问 投妃疫》c法人桨SjC盯、Sj31和Sj3二在川肉组织卜上的表达，儿余可只鼠在第 3次免；ic后第 30 d，经腰部感染 10剃毛蝴，42 d后刊杀 且数＃刁鼠成虫数禾吁克nl咧0数多一 豆 日二SA分晋 小鼠＿互 沾。－I二山j仇休。V火表叨，小鼠I1勾幻织能正常表达疫古＊w寺异性蛋白质抗原分于，nH 分析表刃，扔二次抡疫后小鼠山现特异性k 抗体。与＜ 理U水组比较，三个实验组 M氏虫率分别为33．肌、33．狐及27．N％ （AO．01），U 口率分别为 61．86％、74．88＊及 68．87＊（AO．001）。与＊GST 全 ＊，＊＊－GST 和S＊2－GST 组的 刁 口率分别为34．＊％ 11 （KO．001）、18．51％（HO．05）。说明mA疫苗能诱导小鼠产生一定水平的抗日本1亿吸虫感染保护性作用，二价疫苗的保护效果要大于单价疫了。 （二）日本血吸虫组织蛋白酶B加A疫苗的免疫保护效果研究 为了解免疫这径对DNA lie苗的影响，进一步验证二价疫苗的效果，将48只6～8周龄BALB八鼠随机分为4组，每组12只，对照组 u组)肌肉注射纯化的空白质粒载体VR1012，实验组①组)皮下