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目的:本研究旨在探讨氧化应激对成骨细胞功能影响中micro RNA的作用机制,以及FRAX?对绝经后女性高糖应激状态下骨折概率的评估。方法:1、采用不同浓度过氧化氢(H2O2)对MC3T3-E1细胞进行不同时长的刺激,细胞增殖/毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)实验、实时聚合酶链反应(Realtime PCR)检测细胞损伤、氧化应激、成骨分化等标志物以及micro RNA的表达水平。2、根据前期实验结果,用0.3m M H2O2干预MC3T3-E1细胞成骨分化过程,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定及染色鉴定细胞成骨分化水平、Real-time PCR检测成骨标志基因m RNA的表达水平,以此来观察H2O2对成骨细胞分化能力的影响。3、干预MC3T3-E1细胞中mi R-141或mi R-200a的表达,并对其进行H2O2刺激,Realtime PCR检测细胞成骨分化标志物的表达水平,鉴定mi R-141或mi R-200a在该细胞株成骨分化过程中的潜在作用。4、采用FRAX?中国模式计算绝经后女性在高糖应激状态下10年内髋部骨折概率和主要骨质疏松性骨折概率。结果:1、在不同浓度及不同时长H2O2刺激下,MC3T3-E1细胞的死亡率出现显著差异,呈时间-浓度依赖性。氧化应激标志物超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、DNA修复基因(growth arrest and DNA damage 45,Gadd45)皆发生不同程度的升高;成骨分化标志物Runx2转录因子(runt-related transcription factor2,Runx2)、胶原酶I(collagenase I,Col-I)、ALP则发生明显下降;mi R-200a和mi R-141表达水平出现显著增高。2、对MC3T3-E1细胞进行成骨诱导,结果显示:肉眼可见H2O2处理组的ALP染色较正常对照组有明显差异,ALP活性显著低于正常对照组。诱导至3、7天H2O2处理组Runx2、Col-I、ALP的表达也低于正常对照组。表明H2O2刺激可降低MC3T3-E1细胞的成骨分化能力。3、与正常对照组相比,mi R-141或mi R-200a过表达组,成骨标志性基因ALP、Runx2、Col-I表达水平略微下降,mi R-141或mi R-200a敲除组成骨标志性基因ALP、Runx2、Col-I表达水平明显升高。说明下调mi R-141或200a的表达可以缓解氧化应激对MC3T3-E1细胞功能的损伤。4、与健康对照组相比,绝经后女性在高糖应激状态下即所选取2型糖尿病(type 2diabetes mellitus,T2DM)患者的股骨颈(femoral neck,FN)骨密度(bone mineral density,BMD)和腰椎(lumber spine 2-4,L2-4)BMD均显著增高,差异具有统计学意义(P﹤0.05)。但使用FRAX?评估的10年内髋部骨折概率和主要骨质疏松性骨折概率,在T2DM组和健康对照组之间无明显差异。结论:1、氧化应激可造成MC3T3-E1细胞损伤,成骨功能下降,mi R-141或mi R-200a表达上调增加。2、下调MC3T3-E1中mi R-141或mi R-200a的表达可缓解氧化应激对MC3T3-E1细胞功能的损伤。3、高糖应激或需作为独立的危险因素纳入未来的FRAX?测评系统,以更好评估绝经后女性骨折概率。