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本文以溶解性较好的酪朊酸钠为原料，采用控制酶解技术结合分级超滤方法制备ACE抑制肽。该制备方法简单可操作性强，为工业化生产ACE抑制肽提供一条新的途径。
通过对四种商业化蛋白酶(Alcalase2.4L、Protamex1.5MG、PTN6.0S、Neutrase1.5MG)酶解酪朊酸钠后其上清液对ACE抑制活性的比较，发现这四种酶的酶解上清液对ACE都有一定的抑制能力，但差别较大，其中以PTN6.0S效果最好，Alcalase2.4L次之，Protamex1.5MG和Neutrase1.5MG较差。
分别对PTN6.0S和Alcalase2.4L进行正交试验分析，确定PTN6.0S对酪朊酸钠的最佳酶解条件为：pH7.0、反应温度50℃、底物浓度8％、酶用量750U·g-1底物、反应时间10hr，在该条件下测得酶解液的上清的ACE抑制率为80.63％，肽得率为57.69％，DH为19.36％，测定IC50值为0.587mg·mL-1。Alcalase2.4L对酪朊酸钠的最佳酶解条件为：pH8.0、反应温度60℃、底物浓度10％、酶用量750U·g-1底物、反应时间10hr，此时酶解液的上清的ACE抑制率为44.38％，肽得率为58.76％，DH为22.07％，测定IC50值为1.752mg·mL-1。在采用PTN6.0S和Alcalase2.4L对酪朊酸钠进行复合酶解的研究中发现，酶解产物的ACE抑制活性不及单酶高，确定制备用酶采用单一的PTN6.0S。
采用高效体积排阻色谱(HPSEC)分析了PTN6.0S对酪朊酸钠进行酶解后酶解液上清液的组分组成，根据得到的肽谱初步推断酶解反应历程为：在酶解的最初阶段酪朊酸钠胶粒外层的κ-酪蛋白被快速酶解，四级结构解聚，单体被释放出来，随着反应时间的延长各亚基单体逐渐被酶解，酶的活性位点减少，在到达一定时间后，酶可作用的活性位点数目降到最低再加上酶解产物的抑制作用使得产物中小分子肽的含量不再增加，酶解液中存有一定数量的大分子量多肽，PTN6.0S不能将酪朊酸钠完全酶解成小分子肽。
采用不同截留分子量(1KDa、3KDa、5KDa和10KDa)的超滤膜对酪朊酸钠的酶解液分级超滤分离，各级组分ACE体外抑制活性的测定结果显示分级超滤可有效纯化产物中的ACE抑制肽，高活性组分的分子量主要分布在1KDa以下，该组分的ACE抑制活性的IC50值为0.231mg·mL-1，相对于酶解上清液的0.587mg·mL-1纯化倍数达到了2.54倍。HPSEC对各级超滤组分的分析结果表明，各级超滤膜能够对酪朊酸钠酶解液中的肽混合物按照分子量进行有效分离，其中以10KDa的分离效果最好。在膜清洗的过程中，碱性溶液能有效去除膜污染，对恢复膜通量的贡献最大。实验结果表明分级超滤可以作为一种大规模操作的分离手段应用于ACE抑制肽的初步纯化。