目的:由呼吸道病毒包括新型冠状病毒等引起的急性感染,已成为影响人类健康的公共卫生问题。由于仅依靠临床症状无法区分感染病原,因此亟需快速可靠的方法来识别感染病原,以迅速有效阻断病原体传播。本研究基于两种等温扩增技术,包括解旋酶依赖等温扩增技术（thermophilic helicase?dependent amplification,t HDA）和多酶等温快速扩增技术（multienzyme isothermal rapid amplification,MIRA）,联合微流控技术,开发灵敏特异的呼吸道病毒核酸快速检测方法。方法:（1）建立常规RT-t HDA结合侧流层析试纸条（lateral flow dipstick,LFD）检测法:针对新型冠状病毒保守区基因序列设计和筛选RT-t HDA引物,优化反应参数。评估方法学精密度、检出限和交叉反应性。（2）建立常规RT-MIRA-LFD双重检测法:针对新型冠状病毒保守区基因序列设计和筛选RT-MIRA法引物探针。优化反应参数,实现双重快速检测。评估方法学精密度、检出限和交叉反应性。（3）建立并应用适用于微流控芯片的等温扩增体系:测试反应体积和病毒保存液对两种常规等温法的影响。利用建立体系开发RT-MIRA-LFD免提取法。评估方法学精密度、检出限和交叉反应性。以q PCR为金标准,采用90份临床模拟标本和153份咽拭子标本对该适用于微流控芯片的方法进行临床标本验证。（4）建立纸基微流控芯片多重检测法:针对另外4种呼吸道病毒设计筛选适用于微流控芯片的MIRA法引物,优化SYBR Green I浓度等参数。设计制作五通道纸基芯片,整合芯片外MIRA体系,自制便携加热设备启动反应。测试纸基芯片同时检测新型冠状病毒,甲型流感病毒H1、H3型,乙型流感病毒和腺病毒的可行性。结果:（1）常规RT-t HDA-LFD检测法,65℃60 min即可完成新型冠状病毒扩增。精密度实验表明C50±20%的浓度覆盖了C5～C95区间。N基因和E基因的检出限估计值分别为383.0（95%CI,362.7～411.2）copies/m L和357.1（95%CI,348.9～392.6）copies/m L。该体系未与其他呼吸道病原体交叉反应。（2）常规RT-MIRA-LFD双重检测法,引物浓度为200 n M,探针浓度为100n M,单管检测双靶点,38℃下20 min完成扩增。该法精密度实验表明,C50±20%的浓度覆盖了C5～C95区间。ORF1ab基因和N基因的检出限估计值分别为47.7（95%CI,45.4～51.1）copies/m L和47.9（95%CI,44.7～57.0）copies/m L。该法不与其他常见呼吸道病原体交叉反应。（3）RT-MIRA体系适用于微流控芯片,可直接检测不含胍盐的标本。利用该体系建立的新RT-MIRA-LFD法,免核酸提取,周转时间25 min,反应体积10μL。精密度实验表明,C50±20%的浓度覆盖了C5～C95区间。该体系不与其他呼吸道病原体发生交叉反应。ORF1ab基因和N基因的检出限估计值分别为49.5（95%CI,46.8～52.7）copies/m L和48.8（95%CI,46.5～52.6）copies/m L。标本验证结果表明RT-MIRA-LFD免提取法与q PCR法高度一致（Kappa值为1.00,P＜0.05）,敏感度为100.00%（95%CI,96.70%～100.00%）,特异度为100.00%（98.10%～100.00%）。阳性预测值为100.0%（95%CI,96.70%～100.0%）,阴性预测值为100.00%（95%CI,98.10%～100.0%）。（4）纸基微流控芯片检测法,扩增条件40℃20 min,SYBR Green I最适浓度为原液的6×10-2倍。该方法可同时检测新型冠状病毒,甲型流感病毒H1、H3型,乙型流感病毒和腺病毒。结论:（1）本研究成功建立了两种分别基于常规RT-t HDA-LFD和常规RT-MIRA-LFD的新型冠状病毒新型检测方法。（2）本研究在常规法基础上建立了适用于微流控芯片的等温扩增体系,还应用该体系开发了新型冠状病毒免提取检测法。该体系有望用于多种微流控芯片。（3）本研究初步建立了纸基芯片呼吸道病毒多重快速可视化检测法,进一步优化后,有望下一步应用复杂环境的现场检测。