论文部分内容阅读
目的:观察电针对大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型大鼠学习记忆能力的改善及对海马区CACNα1D-HSPB1-CAMSAP2-SNCG途径中关键基因和蛋白表达的影响。方法:将36只体质量为（280±20）g的SD雄性大鼠随机均分为假手术组、模型组和电针组,每组12只。模型组和电针组参考Longa改良线栓法进行MCAO模型制备。假手术组钝性分离血管后即缝合,其余操作与模型组相同。电针组采用电针神庭穴、百会穴进行干预,电针施以疏密波,频率2-10Hz,电流强度1.5-2m A,强度逐渐加大到大鼠耳朵轻微抖动、不嘶叫为度,刺激时间20min,手术后24h开始治疗,每天1次,连续7d,每次电针的正负极都与前一次不同。模型组和假手术组行与电针组同等条件的抓取束缚后回笼,不予治疗。在术后第1天和第7天,参照Zea-Longa法,进行神经行为学评分和平衡木试验;术后3-7d进行水迷宫测试;术后第7天电针干预结束后每组随机选取3只老鼠进行2,3,5—氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyte trazoliumchloride,T TC）染色观察脑缺血状况;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time Quantitative PCR,RT-PCR）检测海马CACNα1d、HSPB1、CAMSAP2、SNCG的m RNA表达;免疫蛋白印迹法（western blot,WB）检测海马中CACNα1d、HSPb1、CAMSAP2、SNCG的表达;免疫组化检测海马中CACNα1d、HSPB1、CAMSAP2、SNCG的表达。结果:1.神经功能缺损评分:可见假手术组未出现神经功能缺损,电针组和模型组术后第1天和第7天神经功能缺损评分均明显高于假手术组（P<0.05）,术后第1天电针组和模型组之间评分差异无统计学意义,术后第7天电针组较模型组评分明显改善（P<0.05）。神经功能缺损评分术后第7天与第1天相比较,模型组评分升高,差异具有统计学意义（P<0.05）,电针组评分显著降低（P<0.05）。2.平衡木实验:假手术组平衡能力评价正常,模型组术后第1天和第7天平衡能力明显低于假手术组,即神经功能缺损评分均高于假手术组（P<0.05）;模型组与电针组术后第1天统计学无明显差异,术后第7天电针组评分明显低于模型组（P<0.05）。3.Morris水迷宫实验:电针组和假手术组无明显差异;模型组的逃避潜伏期相较假手术组延长（P<0.05）;电针组和模型组相比在术后第3、5、6天缩短（P<0.05）。在空间探索实验穿越平台次数中,电针组和假手术组无差异;模型组穿越平台次数较假手术组和电针组显著减少（P<0.05）。4.TTC染色:假手术组大鼠脑切片呈现鲜红色,模型组大鼠可见大面积灰白色梗死灶,电针组也可见灰白色梗死灶,但面积小于模型组。5.荧光定量PCR实验:与假手术组相比,模型组CACNα1d m RNA表达量显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,模型组HSPB1、CAMSAP2、SNCG表达量显著升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与电针组相比,模型组CACNα1d m RNA表达量降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,HSPB1、CAMSAP2、SNCG的m RNA表达升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。6.免疫印迹法实验:与假手术组相比,模型组的HSPB1、CAMSAP2、SNCG的蛋白表达量升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与电针组相比,模型组的HSPB1、C AMSAP2、SNCG的蛋白表达量显著上升,差异具有统计学意义（P<0.05）。7.运用免疫组化法观察:与假手术组相比,模型组CACNα1d的细胞阳性降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;与电针组相比,模型组HSPB1、CAMSAP2、SNCG的细胞阳性率升高（P<0.05）。结论:1.针刺神庭、百会穴可有效促进脑缺血再灌注大鼠神经功能的恢复。2.针刺神庭、百会穴可促进脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力,减轻神经元损伤。3.电针改善MCAO大鼠学习记忆能力的机制可能是通过影响海马组织中的CACNα1D-HSPB1-CAMSAP2-SNCG途径,促进CACNα1d的表达,抑制CAMSAP2、HSPB1和SNCG的表达。可能通过促进信号传导、抑制炎性递质的释放、修复受损的血管和降低细胞的异常代谢的方式修复脑功能,减小脑组织损伤,改善学习记忆能力。