缺血性脑中风是一种严重威胁人类健康和生命的脑血管疾病、多发病,具有发病率高、死亡率高、致残率高、复发率高的特点。目前,单靶点药物及筛选模型不能满足复杂疾病的治疗目的,本研究采用神经血管单元整合靶点,对益气解毒方抗脑损伤协同作用进行了研究。目的:建立细胞水平的神经血管单元药物评价平台;基于神经血管单元的组合药物-益气解毒方的抗缺血性脑中风作用研究;益气解毒方抗缺血性脑中风协同作用研究。方法:采用提取的原代大鼠皮层细胞和大鼠脑微血管内皮细胞的共培养,建立体外神经血管单元模型,并对3种细胞及紧密连接蛋白Claudin-5进行免疫荧光鉴定;探讨神经血管单元损伤剂合理诱导浓度,并摸索益气解毒方对神经血管单元保护的有效浓度依赖关系;进行基于神经血管单元的不同时间点,不同浓度的益气解毒方单一组分给药,两两给药,益气解毒总方给药的协同药效学评价。结果:1.建立并规范了神经血管单元模型构建方法,通过对其结构和功能的验证证明了造模成功。2.确定了造成神经血管单元模型损伤的损伤剂及其诱导浓度为1 mM/L过氧化氢与5 mM/L L-谷氨酸联合诱导。益气解毒方有效浓度2 μM/L、10 μM/L、50 μM/L对模型动态评价指标—跨内皮细胞电阻值变化率、FITC-BSA透过性、荧光素钠透过性、碱性磷酸酶活力、髓过氧化酶活力、单胺氧化酶活力均具有浓度依赖性改善作用;3.由益气解毒方单一组分给药,两两给药,益气解毒总方给药,不同浓度、不同时间点协同药效学评价结果可得出:两两给药与单一给药相比,药效较好,而总方给药较单一给药与两两给药,效果最佳。结论:1.本课题建立的体外神经血管单元模型可模拟在体血脑屏障功能,具有多靶点、系统整合的特点,并可将神经-血管保护进行动态关联,较之单靶点、单细胞的活性评价模型具明显优越性,尤其适合于中药复杂体系研究,对于脑病预防和治疗中药复方体外活性筛选和评价提供了有效的手段。2.首次将“神经血管单元”这一中风概念性模型赋予实质性内容,建立动态监测的定量指标体系,成功用于源自于临床的脑病治疗组合中药-益气解毒方的药效评价和协同作用研究,通过多指标系统评价结果可知:人参总皂苷、黄连素、栀子苷三成分组合用药可发挥最强药效,具有明显协同作用,且栀子苷可能在复方中发挥协同药效作用中起重要作用。