毛蕊异黄酮葡糖苷对TAA致BRL-3A细胞氧化应激的保护作用研究

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目的:探讨毛蕊异黄酮葡糖苷(Calycosin-7-O-β-D-glucopyranoside,CG)对硫代乙酰胺(TAA)致BRL-3A细胞氧化应激的保护作用。方法:以BRL-3A细胞为研究对象,通过TAA(0.18mol/L)损伤BRL-3A细胞2h建立氧化应激模型。用不同浓度的CG对细胞进行预处理(TAA损伤前12h加药),用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,试验设定空白对照组(N组)、氧化损伤组(TAA)组、低浓度(1Omg/L)CG组(C1组)、中浓度(20mg/L)CG组(C2组)、高浓度(40mg/L)CG组(C3组)、联苯双酯(DDB)阳性对照组(PC组)。微板法检测细胞上清中丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST/GOT)活力;微板法、比色法检测细胞内总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、过氧化氢酶(CAT)活力及丙二醛(MDA)含量;荧光显微镜观察并使用荧光酶标仪和流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量的变化;紫外分光光度计法检测肝微粒体(microsome)中CYP450和细胞色素b5含量以及CYP2E1活性;Real-time PCR法检测细胞CYP2E1 mRNA的相对表达量;Western Blot法检测细胞CYP2E1蛋白表达情况。结果:当TAA浓度为0.18mol/L时,BRL-3A细胞存活率约为50%。TAA诱导的氧化应激导致BRL-3A细胞存活率、抗氧化能力的降低,转氨酶活性、细胞内ROS水平、CYP2E1mRNA的相对表达量和蛋白表达量升高。与TAA组相比,CG预处理组(10mg/L、20mg/L、40mg/L)不同程度地升高细胞存活率、抗氧化能力,降低转氨酶活性、细胞内ROS水平、CYP2E1 mRNA的相对表达量和蛋白表达量。其中,以CG浓度为40mg/L时,保护效果最佳。结论:CG对TAA致BRL-3A细胞的氧化应激具有保护作用,使TAA致细胞氧化应激状态得到显著缓解。
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