绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白(JSRV-Env)对大鼠的致瘤性的研究

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目的:为深入探讨绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白(JSRV-Env)的致瘤性作用,以及对动物机体各项生理指标和相关基因的影响。  方法:将真核表达质粒pcDNA3.1-env用体内转染试剂经尾静脉转染到幼龄大鼠体内,在转染21天后采用RT-PCR的方法及免疫组化法检测真核表达质粒pcDNA3.1-env在大鼠体内的表达;在转染6个月内对转染大鼠进行临床指标测定,每隔30d检测外周血中淋巴细胞及其亚群的动态变化以及淋巴细胞凋亡情况,同时进行血气分析和肿瘤标志物的检测;对大鼠肺脏组织K-ras基因、P53基因用SSCP的方法检测基因突变情况;通过制作病理切片观察组织学病理变化。  结果:转染21d后真核表达质粒pcDNA3.1-env在大鼠肺脏组织存在表达。在转染180d的期间内,外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞水平在整个过程未呈现出显著变化;凋亡细胞水平在整个过程中没有发生明显的凋亡程度变化;血气分析结果显示pCO2、 pO2、 Hct、 BE(ecf)等十六项指标在不同时期与对照组比较,不存在显著性差异。肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)和甲胎蛋白(AFP)检测结果均在正常范围内,转染组与对照组比较没有发生显著变化。K-ras基因、P53基因没有发生突变情况。病理组织学观察没有发现特征性病理学变化。  结论:本研究在大鼠体内检测到JSRV-env基因mRNA表达,同时可检测到Env基因的蛋白表达,证明已经成功的将JSRV–env基因转染进肺脏细胞胞浆内,而JSRV的Env糖蛋白除了最初在病毒侵入细胞过程中的作用外,它还具有类似病毒致癌蛋白的作用,能够直接刺激细胞转化,这为下一步的致瘤作用奠定了初步的基础。本实验对转染JSRV pcDNA3.1-env真核表达质粒的大鼠分别进行血气分析检测,淋巴细胞亚群变化的检测,淋巴细胞凋亡情况的检测,肿瘤标志物的检测,相关基因突变的检测以及组织病理学检测,和对照组比较均未发现明显的变化,证实绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(JSRV-env)对大鼠尚未产生致瘤性作用。其主要原因可能是绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(JSRV-env)没有整合到大鼠的基因组中,从而没有达到致瘤的作用;也可能是动物种属差异、或者是作用时间不够长造成的后果。
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