负压伤口治疗对糖尿病足溃疡创面肉芽组织中过氧化物还原酶2表达的影响

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目的探究糖尿病足溃疡(diabetic foot ulcer,DFU)患者经负压伤口治疗(negative pressure wound therapy,NPWT)前后创面肉芽组织中过氧化物还原酶2(peroxiredoxin-2,PRDX2)的表达变化及其临床意义,为揭示NPWT在促进慢性下肢溃疡伤口愈合中的机制提供新的理论依据。方法选取自2020年6月1日至2021年11月31日在医院健康管理中心进行体检的健康志愿者52例(NC组)、内分泌科住院进行NPWT的2型糖尿病足溃疡患者48例(DFU组)以及2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)不伴有并发症的患者42例(DM组)、烧伤科住院进行NPWT的非糖尿病慢性下肢溃疡患者16例(SUC组)。根据NPWT前后将DFU组分为DFU前组与DFU后组,SUC组分为SUC前组与SUC后组。收集所有受试者的一般资料、空腹外周静脉血以及DFU前组、DFU后组与SUC前组、SUC后组患者创面肉芽组织。采用酶联免疫吸附实验((enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对各组血清中PRDX2的表达量进行测定;采用Western blots、免疫组化法、荧光定量PCR法对DFU前组、DFU后组与SUC前组、SUC后组创面肉芽组织中PRDX2的相对表达量进行测定;使用相关检测试剂盒对DFU前后组创面肉芽组织中氧化应激标志物进行检测,包括超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、还原型谷胱甘肽(GSH)含量。根据DFU组与SUC组NPWT前后所测各指标值计算治疗前后的变化值(Δ值)。结果用SPSS 25.0软件进行统计分析,所有P值均为双侧检验,P<0.05代表差异有统计学意义。结果1.ELISA测定各组血清PRDX2浓度结果显示,DM组、DFU前组与NC组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),SUC前组较NC组下降,差异有统计学意义(P<0.001)。DFU前组与DM组比较,差异无统计学意义(P>0.05),SUC前组较DM组下降,差异有统计学意义(P=0.003)。与DFU前组相比,SUC前组下降,DFU后组上升,差异有统计学意义(P<0.05)。SUC后组与SUC前组之间差异无统计学意义(P=0.553)。此外,DFU组与SUC组患者经NPWT前后血清PRDX2浓度变化值之间的差异有统计学意义(P=0.015)。2.Western blots检测各组创面肉芽组织中PRDX2蛋白表达量的结果显示,DFU前组与SUC前组之间差异无统计学意义(P=0.059);与DFU前组相比,DFU后组增加,差异有统计学意义(P=0.016);与SUC前组相比,SUC后组增加,差异有统计学意义(P=0.012)。此外,DFU组及SUC组经NPWT前后创面肉芽组织中PRDX2蛋白相对变化量之间的差异无统计学意义(P=0.462)。3.荧光定量PCR检测各组创面肉芽组织中PRDX2 m RNA表达量结果显示,DFU前组与SUC前组之间差异无统计学意义(P=0.070)。与DFU前组相比,DFU后组增加,差异有统计学意义(P<0.001);与SUC前组相比,SUC后组增加,差异有统计学意义(P=0.001)。DFU组及SUC组经NPWT前后创面肉芽组织中PRDX2 m RNA相对变化量之间的差异无统计学意义(P=0.110)。4.免疫组化检测各组创面肉芽组织中PRDX2的平均光密度值结果显示,DFU前组与SUC前组之间差异无统计学意义(P=0.896);与DFU前组相比,DFU后组上升,差异有统计学意义(P<0.001);与SUC前组相比,SUC后组上升,差异有统计学意义(P=0.001)。DFU组及SUC组经NPWT前后创面肉芽组织中PRDX2平均光密度值的相对变化值之间差异无统计学意义(P=0.706)。5.氧化应激标志物检测结果显示,与DFU前组相比,DFU后组SOD活性与GSH含量上升,而MDA含量下降,差异均有统计学意义(SOD:P<0.001;GSH:P<0.001;MDA:P<0.001)。6.Spearman相关分析显示,DFU组血清中PRDX2的浓度与SOD活性呈正相关(r=0.266,P=0.031),与MDA含量呈负相关(r=-0.298,P=0.015),而与GSH含量(r=0.184,P=0.139)无相关关系;DFU组创面肉芽组织PRDX2的蛋白表达与SOD活性、GSH含量均呈正相关(SOD:r=0.528,P=0.036;GSH:r=0.556,P=0.025),与MDA含量呈负相关(r=-0.797,P<0.001);在DFU组中,创面肉芽组织中ΔPRDX2蛋白与ΔWBC、ΔNEUT、ΔCRP均呈负相关(ΔWBC:r=-0.598,P<0.001;ΔNEUT:r=-0.369,P=0.023;ΔCRP:r=-0.446,P=0.005),而与ΔPCT之间无相关关系;在SUC组中,ΔPRDX2浓度与ΔCRP呈正相关(r=0.582,P=0.018),而与ΔWBC、ΔNEUT、ΔPCT之间均无相关关系,创面肉芽组织中ΔPRDX2蛋白与ΔCRP、ΔPCT呈负相关(ΔCRP:r=-0.968,P<0.001;ΔPCT:r=-0.628,P=0.009),而与ΔWBC、ΔNEUT之间无相关关系;DFU组患者经NPWT前后血清PRDX2浓度变化、创面肉芽组织中PRDX2蛋白表达变化与4周伤口愈合率之间呈正相关(血清:r=0.338,P=0.019;创面肉芽组织:r=0.329,P=0.023);而SUC组患者经NPWT前后血清PRDX2浓度变化、创面肉芽组织中PRDX2蛋白表达变化与4周伤口愈合率之间无相关关系(P>0.05)。结论1.PRDX2蛋白在经NPWT后的慢性下肢溃疡创面肉芽组织中表达上调;2.DFU患者经NPWT前后创面肉芽组织中PRDX2蛋白的高表达改变与伤口愈合相关。
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