【摘 要】
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目的:（1）探索HFSCs分化成为平滑肌细胞过程中mi R-145的可能作用机制;（2）通过文献及工具网站进行查阅筛选,选定mi R-145可能的下游靶基因并研究其相关作用机制。方法:（1）分别用TGF-β1、BMP4和TGF-β1+BMP4刺激第三代大鼠HFSCs,干预后1,3,5,7天利用q RT-PCR检测平滑肌细胞特异性蛋白的m RNA表达水平;使用TGF-β1+BMP4诱导HFSCs,m
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目的:（1）探索HFSCs分化成为平滑肌细胞过程中mi R-145的可能作用机制;（2）通过文献及工具网站进行查阅筛选,选定mi R-145可能的下游靶基因并研究其相关作用机制。方法:（1）分别用TGF-β1、BMP4和TGF-β1+BMP4刺激第三代大鼠HFSCs,干预后1,3,5,7天利用q RT-PCR检测平滑肌细胞特异性蛋白的m RNA表达水平;使用TGF-β1+BMP4诱导HFSCs,mi R-145表达的测试时间点与前保持一致。（2）分别合成mi R-145模拟物及抑制物慢病毒,构建稳转株,同时对mi R-145模拟物组、mi R-145抑制物组和对照组进行诱导培养,检测平滑肌细胞特异性蛋白转录及蛋白表达水平。（3）通过不同靶标预测网站对mi R-145的下游靶标基因进行预测,取交集后通过查阅文献及Pathway Card关联,选出可能下游靶点,进行荧光素酶报告基因实验,同时检测mi R-145模拟物组、mi R-145抑制物组和对照组中KLF-4m RNA的表达水平,验证靶向调控关系。（4）合成si-KLF-4慢病毒,构建稳转株,诱导后检测平滑肌细胞特异性蛋白转录和蛋白水平的表达情况,验证KLF-4的功能。结果:（1）TGF-β1+BMP4组a-SMA及SM-MHC的表达水平与TGF-β1、BMP4单独干预组相比显著升高,有统计学差异（P＜0.05）;且在TGF-β1+BMP4诱导干预下,随着时间进展mi R-145的表达量逐步升高。（2）mi R-145模拟物及抑制物慢病毒转染后,构建的稳转株转染效率高、荧光表达稳定;同时发现mi R-145模拟物组的平滑肌细胞特异性蛋白m RNA表达水平明显高于对照组及mi R-145抑制物组（P＜0.05）,同时mi R-145抑制物组的平滑肌细胞特异性蛋白m RNA表达水平低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;进一步用检测了各组不同时间平滑肌细胞特异性蛋白的表达水平,趋势及结果与m RNA表达水平一致。（3）通过预测,最终选出KLF-4作为mi R-145可能下游靶点,通过荧光素酶报告基因实验结果证实,mi R-145-5p能够靶向结合KLF-4 m RNA的3’-UTRs来调控KLF-4的表达,同时mi R-145模拟物组、在差异方面mi R-145与KLF-4 m RNA之间的表现水平存在较大差异,此外这种表达与其呈现负面关系。（4）毛囊干细胞被诱导后,si-KLF-4组较对照组平滑肌细胞特异性蛋白转录和蛋白水平的表达均明显升高（P＜0.05）。结论:（1）mi R-145对HFSCs分化平滑肌细胞的进程存在调节作用,其表达水平与平滑肌特异性蛋白表达呈正相关。（2）mi R-145能够靶向抑制KLF-4的标达,从而影响HFSCs诱导分化为平滑肌细胞的进程。
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