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研究背景:p300是具有组蛋白乙酰转移酶(histone acetyl-transferases,HATs)活性的转录辅因子,可以乙酰化4个核心组蛋白以及其他转录因子,调控许多基础生物学过程,包括生长、发育以及癌发生和凋亡。肿瘤细胞抑癌基因启动子组蛋白乙酰化降低,导致其表达下调。CBP/p300能促进对关键肿瘤抑制因子p53、BRCA1和FOXO3a的转录活化,从而抑制肿瘤的发生;然而,作为癌基因c-Myc、c-Myb和AR的辅活化因子,在特定条件下CBP/p300也可促进细胞增殖和癌症发生。野生型p300质粒pc DNA3.1中所含的HAT结构域是正常的,突变型p300质粒pc DNA3.1的HAT结构域缺失。研究目的在胃癌细胞中,p300对胃癌细胞增殖的效应;野生型p300以及突变型p300对胃癌细胞组蛋白乙酰化的效应;并探讨p300对胃癌细胞增殖效应的机制。材料与方法1.实验分组将胃癌细胞SGC7901和BGC823随机分为四组:实验组为三组,分别转染2μl浓度为400ng/μl的野生型质粒p300、突变型质粒p300、空质粒,分别作用24h、48h和72h;对照组加入同体积的无血清双抗的RPMI1640培养基。2.MTT实验收集上述实验组和对照组的细胞,MTT法分别检测胃癌细胞SGC7901和BGC823在24h、48h和72h时间点的增殖情况。3.免疫细胞化学收集培养24h、48h和72h的实验组和对照组细胞分别做细胞滴片,应用免疫荧光观察四组细胞的ac K14-H3以及p300的免疫反应性并进行半定量分析,检测不同p300表达质粒转染的胃癌细胞组蛋白乙酰化程度。4.流式细胞术应用流式细胞术检测转染了不同p300表达质粒的胃癌细胞SGC7901和BGC823的细胞周期。观察p300是否可以诱导细胞周期阻滞。5.统计学处理应用SPSS20.0统计软件处理数据,P<0.05为差异有显著性。结果:1.p300对胃癌细胞增殖的影响对于胃癌细胞SGC7901,转染24h后,野生型p300组跟突变型p300组胃癌细胞增殖无显著性差异(P>0.05);转染48h、72h后,野生型p300组胃癌细胞增殖显著低于突变型p300组(P<0.05)。对于胃癌细胞BGC823,转染24h、48h后,野生型p300组胃癌细胞增殖显著低于突变型p300组(P<0.05),转染72h后,野生型p300组跟突变型p300组胃癌细胞增殖无显著性差异(P>0.05)。胃癌细胞SGC7901和BGC823,实验组胃癌细胞增殖显著低于对照组(P<0.05),表明转染p300不同表达载体可明显抑制胃癌细胞增殖(P<0.05)。2.p300对胃癌细胞14位赖氨酸乙酰化的组蛋白H3免疫反应性的效应ac K14-H3 IR显示为绿色荧光,对于胃癌细胞SGC7901,野生型p300组及突变型p300组阳性细胞的平均ac K14-H3 IR显著高于对照组(P<0.01),野生型组阳性细胞平均ac K14-H3 IR显著高于突变型组(P<0.01);对于胃癌细胞BGC823,转染24h、48h后野生型组阳性细胞平均ac K14-H3 IR显著高于对照组(P<0.01),且野生型组阳性细胞平均ac K14-H3IR显著高于突变组(P<0.01),72h野生型组阳性细胞平均ac K14-H3 IR跟对照组无显著性差异(P>0.05)。表明p300可显著提高胃癌细胞SGC7901和BGC823的ac K14-H3 IR。3.胃癌细胞p300的免疫反应性p300的IR显示为绿色,在胃癌细胞SGC7901和BGC823中,野生型p300组阳性细胞平均IR显著高于对照组(P<0.01),野生型p300组阳性细胞平均IR显著高于突变型p300组(P<0.01);表明p300可显著提高胃癌细胞SGC7901和BGC823的p300 IR。4.流式细胞术实验结果野生型p300质粒以及突变型p300质粒转染胃癌细胞48h后,与对照组相比,处于G0/G1期的胃癌细胞数显著增加(P<0.05),同时处于S期细胞数显著下降(P<0.05),且野生型组跟突变型组无显著性差异(P>0.05),表明p300可以诱导胃癌细胞周期阻滞。结论:野生型p300以及缺失HAT结构域的突变型p300均可以抑制胃癌细胞的增殖,野生型p300的抑制作用更强,并且诱导胃癌细胞周期阻滞。p300可能通过乙酰化抑癌基因组蛋白,从而抑制胃癌细胞增殖。