异常黏液质证候及其方药干预大鼠阴茎组织差异性表达microRNA的筛选及生物信息学分析

来源 :新疆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:maye626
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:筛选异常黏液质证候及药物干预大鼠阴茎组织差异表达miRNA,建立候选miRNA标志物体系,验证miR-140-3p及miR-486两项关键指标,探讨其生物学意义。方法:取80只性功能正常SD雄性大鼠,从中随机抽取10只大鼠设为正常对照组(N),余70只为造模组,用芫荽实+菠菜实+湿寒性环境的干预条件建立异常黏液质证候模型。动态观测大鼠生物学表征与勃起功能改变,至确认已建立稳定的异常黏液质证候动物模型大鼠,通过APO勃起实验和交配实验筛选出均未能成功勃起和交配的大鼠,即阳痿病证模型,随机分为阳痿病证模型组(BM)、阳痿病证药物组(BY),用于其他实验;其余未成阳痿模型的大鼠,随机分为证候模型组(ZM)、证候药物组(ZY)。药物(伊木萨克片)干预时间为3周,干预期间全程动态观测其生物学表征、勃起能力和性行为能力。实验终结时,取阴茎组织,提取总RNA进行miRNA Illumina高通量测序,进行数据分析。筛选出异常黏液质证候及药物干预相关的差异表达的miRNA,对这些差异表达miRNA进行聚类分析。扩大样本量,对候选差异表达的miRNA进行实时荧光定量PCR(Real-time qPCR)检测,验证其与测序结果的可靠性,并对验证的miRNA进行下游靶基因预测,预测靶基因的GO功能注释以及KEGG pathway分析。结果:(1)生物学表征观测结果:与正常对照组相比,模型组随着造模时间延长逐渐出现少动,毛发乱无光泽,小便清、淡,大便软,不成形,舌苔白腻舌质暗,体重增长缓慢,饮食量增多,饮水量减少,尿和大便量增多等表现。经伊木萨克片对证干预后生物学表征得到有效改善。(2)APO实验与交配实验结果:与正常对照组相比,模型组造模因素干预后,随着时间延续,勃起潜伏期显著延长,勃起次数显著减少。同时爬背潜伏期、插入潜伏期、射精潜伏期显著延长,而爬背次数、插入次数、射精次数显著减少,经对证维药伊木萨克片干预后,其勃起潜伏期明显缩短,勃起次数显著增加,爬背潜伏期、插入潜伏期、射精潜伏期明显缩短,而爬背次数、插入次数、射精次数显著增加。(3)Illumina Hiseq高通量测序结果:证候模型组与正常对照组相比,差异显著的miRNA有147个,其中以log2 Ratio的绝对值>0.8为条件,最后确定与证候相关候选差异表达的miRNA 15个,其中13个miRNA上调,2个miRNA下调。证候药物组与证候模型组相比,差异显著的miRNA有131个,其中以log2 Ratio的绝对值>0.8为条件,最后确定候选差异表达的miRNA 3个,均下调,伊木萨克片干预出现逆转变化的miRNA有2个。(4)实时荧光定量PCR验证结果:miR-140-3p和miR-486表达结果与高通量测序一致。与正常对照组相比,证候模型组miR-140-3p表达水平升高,但差异无统计学意义(P(29)0.05)、miR-486表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与证候模型组相比,在证候药物组miR-140-3p、miR-486表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)成功制备维医异常黏液质证候大鼠模型,其定量和定性的生物学表征符合维吾尔医临床证候特点,同时出现勃起潜伏期明显延长,性行为能力明显减退等特点,伊木萨克片干预能显著改善生物学表征及性功能减退。(2)经对筛选出的差异表达miRNA进行生物信息学研究综合分析,认为miR-140-3p、miR-143-3p、miR-486等15个miRNA可作为异常黏液质证候选分子标志物,miR-434-3p、miR-486等3个miRNA可作为伊木萨克片干预靶点的候选分子标志物。(3)经验证后,认为miR-486可作为异常黏液质证发生相关的标志物,miR-140-3p、miR-486可能是伊木萨克片干预的靶点分子标志物。miR-140-3p可能通过其靶基因TGF-?3参与组织纤维化的形成,而miR-486可能通过其靶基因PTEN参与糖脂代谢的调控,但需进一步验证。
其他文献
预制装配式混凝土建筑结构有利于大规模的生产、建造速度快、工期时间短、节能环保等优点,目前已经被广泛应用于建筑行业的各个领域。但是目前现阶段对于框架-剪力墙结构(简称框剪结构)的研究还比较少,对装配式混凝土建筑结构的研究,还是主要集中于框架结构和剪力墙结构,而且对框剪结构中柱-墙的连接方式及连接性能的研究更少。为了提高装配式柱-墙结构的预制化率,本文提出了四种钢筋搭接连接预制柱与预制墙的方法,设计并
近年来,随着能源需求的不断增长,不可再生能源逐渐干涸,太阳能作为一种清洁环保的可再生资源己经成为替代不可再生能源的重要选项。其中,解决此类问题的主要手段之一为太阳能光伏发电技术。在制作太阳能电池片过程中对质量检测要求是非常严格的,比如是否出现物理破损、表面划痕,是否出现断栅,是否出现微裂纹等问题。在生产中,以上缺陷的检测需要专业的检测人员来进行目视检测,这样往往会出现检测效率低、主观臆断和疲劳,随
目的本实验以肠易激综合征(IBS)模型大鼠为研究对象,采用多通道同步记录技术、荧光PCR和免疫组织化学法等手段,观察电针“内关”、“大肠俞”穴对IBS大鼠肠道敏感性、情绪心
2014~2015年在四川成都平原进行播栽期比较试验。试验根据该地区热量条件以及油(麦)-稻两熟制水稻机械种植方式下可能的安全生育天数,选用当地适宜的生育期品种类型及其主推的
急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)是一种冠状动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)并发血栓形成而导致心肌缺血或梗死的心血管疾病,对病人的生活质量和寿命产生严重
本研究利用了国家信息中心提供的2014年6月至2017年9月全中国120个站点的高分辨率探空资料分析中国重力波的统计特征。在研究中,选择了最新的资料处理方法并进行了改进,在参数计算上也制定了各项质控方案以得到更为准确的重力波参数(能量、波长、固有频率及传播方向),我们将重力波分为对流层(2-10km)和下平流层(18-25km)来研究,在分析时结合了地理环境、纬度差异和背景大气等因素,并考虑了噪音
为了保证试验结果具有可比性,试验机的主传动系统一般要求实现等速往复运动规律,如拉压疲劳试验机、减震器试验机等。但现有的机械式试验机主传动系统一般只能实现近似等速运动规律,而不能严格实现等速运动规律。因此,针对可实现等速运动规律的机械传动系统开展研究是非常有必要的。本文主要围绕着可实现等速运动规律的机械传动系统的运动方案、结构设计、刚体动力学以及弹性体动力学等问题开展了深入的研究。主要研究内容如下所
语文作为在各个学科中基础性和综合性最强的一门学科,他对学生在语言表达能力和写作能力以及思维能力上起着重要的作用。课后练习题则是语文教材中的重要组成部分,有着完善语文教师课堂教学和提升学生语文能力的功能。之前的研究者对中职语文教材课后习题的分析研究较少,教师和学生在课后习题的使用过程中有许多层面和问题亟待提高和改善。本文以高教版五年一贯职业教育通用教材为例,以中职语文课程标准为依据,对课后习题的题量
国以民为本,民以食为天,食以安为先,食品安全关系到国计民生,责任重于泰山。但是食品安全问题量多面广,各类突出问题和矛盾仍然不少,给我国食品安全带来巨大挑战,仅靠人员有
耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans,DR)是一种能在极端环境胁迫下生存的细菌,由于具备极强的抗辐射能力,现已作为研究DNA损伤和修复机制的模式生物。耐辐射奇球菌的DNA损