泥蚶SSR、SNP标记开发及在群体遗传变异分析中的应用

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泥蚶(Tegillarca granosa),俗称血蚶、花蚶、粒蚶,为我国四大海水养殖贝类之一。泥蚶肉质鲜美、营养丰富、市场前景广阔。本文利用泥蚶454转录组文库(SRA052081),分别开发了139个EST-SSR位点和78个EST-SNP位点,并利用多态SSR位点对泥蚶四个地理群体进行了遗传多样性分析。本研究为泥蚶的种质资源保护、遗传多样性分析、遗传连锁图谱的构建以及种群鉴定提供有力工具。1、泥蚶多态性EST-SSR标记的批量开发及重叠群和单拷贝序列序列开发SSR的差异分析转录组文库分为重叠群(contig)序列与单拷贝(singleton)序列,利用SSRHunter软件搜索这两种序列中2-6核酸重复序列且长度不小于12bp。singleton序列中检出132个SSR位点41对引物获得稳定清晰的条带,24对引物的扩增产物表现为多态性。在contig序列中筛选到246个候选位点,其中获得稳定扩增产物的有157个,其中115个表现为多态性。来源于singleton序列的24个多态性位点在泥蚶30个体中共获得84个等位基因,多态位点等位基因数介于2-5个,平均等位基因数为3.5个,PIC值介于0.043-0.696之间,平均值为0.391,观测杂合度、期望杂合度分别为0.000-0.591、0.045-0.727。24个多态位点中有11个高度多态位点(PIC>0.5)、4个中度多态位点(0.25<PIC<0.5)、9个低度多态位点(PIC<0.25)。各多态位点经哈迪-温伯格平衡检测,并用Bonferroni correction法进行校正,除Tg10、Tg11、Tg12、Tg17、Tg18、Tg21、Tg24之外,其余位点均显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.05)。同时来源于contig序列的115个多态位点共获得434个等位基因,多态位点的等位基因数为2-10个,平均等位基因数为3.78。观测杂合度、期望杂合度与PIC值范围分别介于0.000-1.000、0.040-0.799和0.038to0.825。其中29个位点为高度多态,42个为中度多态。38个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡。2、基于转录组的78个泥蚶多态性EST-SNP标记的开发泥蚶EST序列拼接后获得23320个contig序列,利用QualitySNP software对contig序列进行SNP位点筛选,共获得19329个EST-SNP候选位点,其中转换类型有12401,颠换类型6928。依据引物设计原则,随机选取了275个候选SNP位点进行引物设计。其中147对引物在泥蚶中获得稳定扩增条带,在泥蚶群体验证分型中101对引物获得准确分型,78个位点为多态性位点,转换类型为54个,即A-G和T-C分别占23个、31个;颠换类型为24个即A-C、A-T、G-C和G-T分别占13、4、2和5个。观测杂合度为0.0000-0.9000,平均值为0.2982;期望杂合度为0.1997-0.5088,平均值为0.4411;最小等位基因为0.0167与0.5000之间。32个位点极显著偏离哈迪-温伯格平衡,11个位点为显著偏离平衡。3、东南沿海4个地理泥蚶群体的遗传变异分析共采用9个杂合度较高的SSR位点对四个不同地理的泥蚶进行群体分析。9对引物在4个群体的160个体中共得到了76个等位基因,平均等位基因数为8.44。每个位点得到的等位基因数介于3到12个。江苏与浙江群体的遗传分化程度微弱,广东与福建也分化微弱。其中分化程度最高的为浙江与福建,其Fst为0.0766。江苏与浙江的遗传距离最小为0.1151,广东与福建群体的遗传距离也是较小的为0.2563,其中遗传距离最远的为福建与浙江为0.5757。
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