论文部分内容阅读
目的:观察丹参酮IIA(Tanshinone IIA，Tan IIA)对人肝癌细胞HepG2增殖、凋亡和周期、自噬及信号转导通路PI3K/AKT/m TOR的影响。方法：采用MTT法检测不同浓度Tan IIA作用人肝癌细胞HepG2不同时间后，Tan IIA对HepG2细胞增殖的影响，并计算细胞增殖抑制率和IC50；应用Heochst33258染色法和流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡和细胞周期；采用免疫荧光染色法、应用荧光显微镜观察HepG2细胞自噬，流式细胞仪检测自噬分子LC3-B、Beclin1的表达；不同浓度Tan IIA作用HepG2细胞48h后，荧光定量PCR检测PI3K/AKT/mTOR信号转导通路相关分子（TSC1/TSC2、PI3K、AKT、mTOR）mRNA的表达。结果：MTT法检测显示，与对照组比，Tan IIA对人肝癌HepG2细胞的增殖具有明显的抑制作用，差异有统计学意义（P<0.05），呈现出时间和剂量依赖性。荧光倒置显微镜下观察显示，与对照组比较，Tan IIA对人肝癌细胞HepG2的生长具有抑制作用，Tan IIA组的凋亡细胞增多、核质浓缩、形成凋亡小体，并随着药物浓度的增加而增多，其中100μmol/L浓度组细胞凋亡明显；流式细胞仪检测显示，10μmol/L、30μmol/L和100μmol/LTanIIA组的凋亡率分别为(21.50±1.87)%、(25.40±1.30)%、(44.20±4.25)%，均高于阴性对照组的(1.10±0.62)%，差异具有统计学意义（P<0.05）。流式细胞仪检测结果显示，与阴性对照组相比，经不同浓度（10μmol/L、30μmol/L和100μmol/L）Tan IIA作用HepG2细胞48h后，随Tan IIA浓度的增加，HepG2细胞G0/G1期细胞数量比例逐渐增多，而S期细胞逐渐减少。荧光倒置显微镜观察显示，与对照组相比较，Tan IIA作用HepG2细胞48h后，LC3B-AF555荧光密度（IOD）随药物浓度的增加而降低，其中，100μmol/L Tan IIA组荧光密度下降的最明显；流式细胞仪结果显示，与对照组相比，Tan IIA作用HepG2后，随着药物浓度的增加，HepG2细胞LC3B和Beclin1的表达量均降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。HepG2细胞凋亡与LC3B和Beclin1表达的相关性分析显示，Tan IIA作用HepG2细胞后，HepG2细胞的自噬与凋亡呈负相关。实时荧光定量PCR检测显示，不同浓度Tan IIA作用HepG2细胞48h后，HepG2细胞PI3K、AKT、mTORmRNA的表达随Tan IIA浓度的增加而降低，而TSC1和TSC2mRNA的表达随Tan IIA浓度的增加而增加。结论：Tan IIA具有抑制HepG2细胞增殖和自噬的作用，并能阻滞HepG2细胞于G0/G1期、诱导HepG2细胞凋亡，与Tan IIA抑制PI3K/AKT/mTOR信号转导通路有关。肿瘤细胞的凋亡与自噬成负相关。