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目的： 1、研究内质网(endoplasmic reticulum, ER)应激对人乳腺癌细胞的毒性效应。 2、探讨ER应激引致非折叠蛋白反应（unfloded protein response, UPR）的激活对MEK/ERK生存信号通路的影响。 3、检测DNA损伤药物和靶向微管药物是否激活ER应激。 4、研究SiRNA敲减GRP78和抑制MEK/ERK通路对乳腺癌细胞化疗敏感性的影响。 方法： 1、随机选取蚌埠医学院第一附属医院2006-2008年间住院病人的乳腺癌术后组织标本50例，以正常乳腺组织标本20例做对照，用免疫组化法检测乳腺癌组织及正常组织中GRP78的表达。 2、以乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3为研究对象，用不同浓度（0、1.5、3、6、9和12μmol/L）衣霉素（Tunicamycin, TM）处理，溴化丙啶（propidium iodide, PI）染色，流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率； 3、以乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3为研究对象，MEK抑制剂U0126预处理1h后，再同上处理细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡率。 4、Western blotting检测正常培养细胞株HUVEC、WI-38及乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3中GRP78的表达；用TM不同时间（0、6、12、24和36h）处理细胞，Western blotting检测GRP78的表达；同时用Western blotting检测MEK/ERK通路ERK1/2、pERK1/2的表达。 5、MEK抑制剂U0126预处理MDA-MB-231、SK-BR-3细胞，然后给予TM处理，用RT-PCR法检测GRP78mRNA的表达。 6、细胞毒类药物（顺铂，阿霉素）和靶向微管药物（多西紫杉醇，长春瑞滨）处理MDA-MB-231、SK-BR-3细胞，Western blotting检测GRP78的表达。 7、MEK抑制剂U0126预处理细胞1h后，再用化疗药物处理细胞，检测凋亡率，观察应用U0126前后凋亡率的变化。 8、SiRNA转染敲减GRP78的表达，检测TM和化疗药物诱导凋亡率的改变。 结果： 一、诱导ER应激对乳腺癌细胞GRP78表达和细胞凋亡的影响。 1、免疫组化结果显示，GRP78在乳腺癌组织中强阳性表达；Western blotting结果显示在乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231及SK-BR-3中GRP78亦呈强阳性表达，而在正常细胞株中，表达较弱。三株乳腺癌细胞中 GRP78表达分别与正常细胞株比较，差异显著（P<0.01）。 2、乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3对TM诱导的细胞凋亡不敏感，凋亡率均小于30％，但是TM可以诱导正常细胞出现有意义的凋亡。 3、TM诱导三株乳腺癌细胞GRP78表达明显上调，与对照组比较，有显著性差异（P<0.01）。 二、干扰MEK/ERK通路对乳腺癌细胞GRP78表达和凋亡的影响 1、ERK1/2在乳腺癌 MDA-MB-231、SK-BR-3细胞中被激活，TM诱导 ERK1/2的进一步激活（P<0.01）。 2、U0126可以下调GRP78蛋白的表达（P<0.05），并且阻断TM对GRP78的上调作用；同时，无论有无 TM时，U0126均下调 GRP78mRNA的转录水平（P<0.05）。 3、U0126增加TM诱导细胞凋亡率，与对照组比较，有显著性差异（P<0.01）。 4、GRP78 SiRNA转染增加TM和U0126诱导的细胞凋亡率，与对照组比较，有显著差异（P<0.01）。 三、靶向GRP78对DNA损伤药物诱导的乳腺癌细胞凋亡的增敏作用 1、长春瑞滨（Vinorelbine, VIN）和多西紫杉醇（Docetaxel, DOC）对GRP78表达无显著影响（P>0.05）；顺铂（Cisplatin, CDDP）、阿霉素（Adriamycin, ADM）上调GRP78的表达（P<0.05）。 2、U0126通过抑制MEK通路增加CDDP和ADM诱导的细胞凋亡（P<0.01）。 3、GRP78 SiRNA转染增加CDDP和ADM诱导的细胞凋亡（P<0.01）。 结论： 本研究结果证明： 1、UPR的激活是乳腺癌适应肿瘤应激环境并对 ER应激致细胞凋亡作用耐受的原因之一。 2、MEK/ERK通路激活促发乳腺癌细胞对ER应激的耐受，一些化疗药通过引发ER应激而激活MEK/ERK通路，因此，抑制该通路可以增加乳腺癌细胞对这些化疗药物的敏感性。 3、GRP78可能是乳腺癌细胞对能够引发UPR激活的化疗药物耐药的靶点之一，抑制GRP78可以增加乳腺癌细胞对这类化疗药物的敏感性。