系统性红斑狼疮患者外周血调节性B细胞的表达及临床意义

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背景系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种病因复杂的自身免疫性疾病,以T、B淋巴细胞高度活化,大量自身抗体产生和复合物沉积等免疫学异常为主要特征。近年来,研究发现一群具有负向调节功能的特殊B细胞亚群,被命名为调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)。Bregs可以通过分泌白介素-10(interleukin 10,IL-10)、IL-35和转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β),影响T细胞、树突状细胞(dendritic cells,DCs)、单核细胞和巨噬细胞等免疫细胞的增殖和分化。多种免疫相关疾病包括感染、肿瘤和胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA),均发现了Bregs的表达水平和调节功能存在异常。关于Bregs在SLE发生发展中的作用,虽然国内外已有一些动物实验进行了证实,但是人类中研究仍然很少且结果不一致。因此,分析Bregs在SLE患者中的表达水平是否存在异常,探讨SLE患者Bregs水平的影响因素,对进一步深入研究Bregs的作用机制和发现SLE新的治疗方法具有重要的意义。目的比较SLE患者和健康者外周血Bregs表达水平是否存在差异;验证CD19+CD24hiCD38hi标记Bregs的有效性;探讨临床及实验室检测指标对SLE患者外周血Bregs水平的影响以及评价Bregs在SLE中的诊断价值。方法本研究共纳入38例女性SLE患者和38例女性健康者。面对面问卷调查获取研究对象的一般资料和SLE患者的临床资料。收集所有研究对象5ml外周静脉血;提取PBMCs;CD19-APC,CD24-PE和CD38-FITC进行荧光染色;流式细胞仪检测CD19+CD24hiCD38hiB细胞(Bregs)的表达水平。采用Mann-Whitney U非参数检验比较SLE患者与健康者Bregs水平的差异;Kruskal-Wallis H非参数检验比较活动期、稳定期SLE患者和健康者Bregs水平的差异;进一步的两两比较采用Dunnett’s T3法。采用Spearman秩相关分析来探讨调查资料对Bregs水平的影响;通过计算曲线下面积(area under the curve,AUC值)、灵敏度和特异度来评价Bregs对SLE的诊断价值。检验水准α=0.05。结果(1)SLE患者外周血Bregs的表达水平和绝对数均明显高于健康者(Z=-3.543,P<0.001;Z=-2.873,P=0.004);CD19+CD24hiCD38loB细胞表达水平明显低于健康者(Z=-2.140,P=0.032);CD19+CD24loCD38hiB细胞表达表达水平明显高于健康者(Z=-5.033,P<0.001)。(2)活动期和稳定期SLE患者外周血Bregs水平均明显高于健康者(均有P<0.05)。(3)SLE患者外周血Bregs水平与SLEDAI(rs=0.099,P=0.561)、C3(rs=0.163,P=0.372)、ESR(rs=0.094,P=0.597)、CRP(rs=-0.204,P=0.272)、Ig A(rs=-0.108,P=0.633)和Ig M(rs=-0.098,P=0.641)无显著相关性;而与Ig G呈现明显正相关(rs=0.468,P=0.021)。(4)糖皮质激素和羟氯喹对SLE患者外周血Bregs表达水平无明显的影响;而环磷酰胺使用者和未使用者外周血Bregs水平存在明显的统计学差异(Z=-2.223,P=0.026)。(5)ROC曲线显示外周血Bregs水平区分SLE患者与健康者的AUC值为0.736(95%CI(0.616,0.857),P<0.001)。结论SLE患者外周血Bregs水平明显升高。SLE患者外周血CD19+CD24hiCD38loB细胞表达水平显著降低,CD19+CD24loCD38hiB细胞表达水平显著升高,提示CD24和CD38是Bregs的有效标记物;活动期和稳定期SLE患者外周血Bregs水平均明显高于健康者,SLE患者外周血Bregs水平与免疫球蛋白Ig G呈显著正相关,且免疫抑制剂环磷酰胺会对Bregs表达水平产生影响,我们推测Bregs可能参与SLE的发生发展。本研究还发现Bregs水平能够较好地区别SLE患者和健康者,为深入研究SLE的诊断方法和发病机理,以及探索SLE新的治疗方法具有重要的意义。
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