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鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)是一种重要的细菌性致病菌,可引起雏鸭感染发病或死亡。已报道的鸭疫里默氏杆菌血清型有21种,其中血清1、2、10型是国内优势血清型。外膜蛋白A(OmpA)是鸭疫里默氏杆菌的重要免疫原性蛋白,在不同血清型中保守性良好。为制备鸭疫里默氏杆菌的免疫胶体金检测试纸条,本研究选用OmpA蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体。将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合后,用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,经腹腔注射BALB/c小鼠制备单克隆抗体。通过单克隆抗体效价及稳定性测定,秋水仙素法进行杂交瘤细胞的染色体分析以及Western blot法鉴定单克隆抗体特异性,共获得3株稳定分泌抗鸭疫里默氏杆菌OmpA的单克隆抗体,分别命名为2D5、2A6、4H8。3株单克隆抗体亚型均鉴定为IgG2a,腹水效价均测定为1:2048000;3株单克隆抗体均与鸭疫里默氏杆菌血清1型RA-CH3株、血清2型RA-NJ3株和血清10型RA-HXb2株发生特异性反应,与大肠杆菌、沙门菌和多杀性巴氏杆菌等其他禽致病菌不发生交叉反应,表明本研究制备的3株单克隆抗体具有良好的抗体效价和特异性,可用于鸭疫里默氏杆菌免疫胶体金检测试纸条的研制。对上述3株单克隆抗体进行的筛选实验,选择单克隆抗体2D5和2A6用作胶体金试纸条的金标抗体和捕获抗体(检测线),将山羊抗鼠IgG抗体包被于硝酸纤维素膜(NC膜)作为控制线,建立了一种用于快速检测鸭疫里默氏杆菌的免疫胶体金检测试纸条,可检测菌液培养物和感染鸭心脏中的鸭疫里默氏杆菌。金标抗体2D5的最佳标记pH是10.0,最佳蛋白标记量是18μg/mL。该试纸条特异性强,可用于鸭疫里默氏杆菌的检测,与大肠杆菌、沙门菌和多杀性巴氏杆菌均不出现交叉反应;灵敏度高,检测限度为1.0×10~6 CFU;性状稳定,4℃条件下能保持稳定至少8个月;反应时间短,15 min内完成反应。对临床样品的检测结果表明该试纸条对感染鸭心脏组织样品的检出率高于组织样品的细菌分离鉴定。综上所述,本研究成功研制了鸭疫里默氏杆菌OmpA单克隆抗体和免疫胶体金检测试纸条;研制的试纸条可用于细菌培养物中鸭疫里默氏杆菌的检测和鸭疫里默氏杆菌感染病鸭的临床快速诊断。