siRNA是广泛存在于生物体内的非编码RNA,其介导的RNAi过程可高效、特异的沉默靶基因,被广泛应用于抗病毒的研究中。已有研究表明,针对流感病毒M,NP等基因的siRNA能够通过抑制基因表达,抑制病毒的增殖。本研究制备了多条针对PR8病毒抗原基因HA和NA的siRNA,测定了其对流感病毒的抑制作用及对基因组的影响。此外,本研究还尝试利用siRNA进行流感病毒疫苗株的重配。在第一部分中,设计了PR8病毒特异地siRNA。通过测序获得疫苗株PR8和野毒株H3N2的序列,根据siRNA设计规则设计了针对PR8病毒HA、NA基因的特异性siRNA。通过序列比对检测并排除与H3N2同源的siRNA序列,最终设计并合成针对PR8的HA和NA基因的特异性siRNA序列共12条。其中包括HA和NA特异的长度为19nt的common siRNA各3条以及长度为25bp的stealth siRNA各3条。在第二部分中,检测了siRNA的抑制效果及特异性。分别在MDCK和MTY6细胞上优化了siRNA抑制实验的转染试剂、浓度及收毒时间等条件。根据优化的条件,通过NA活性、CCID50实验检测了NA特异的siRNA单条、两条及三条联合使用对PR8的抑制效果。结果显示:NA-105与NA-199联合使用的抑制效果最明显,抑制率为86.07%,且不与H3N2发生非特异反应。通过NA活性及血凝实验检测了HA特异的siRNA的抑制效果,显示:HA-56与HA-802联合使用抑制效果明显,抑制率为57.88%,且不与H3N2发生非特异反应。HA与NA特异的siRNA联合使用对PR8的抑制效率,约为95%,高于上述HA或NA siRNA各自联合使用的抑制效果,且对H3N2无抑制作用,特异性好。在第三部分中,用HA和NA特异的siRNA进行PR8与H3N2病毒的重配。采用三种方式制备病毒混合液:(1)在MTY6细胞上分别先后感染PR8和H3N2,细胞病变90%时收获病毒混合液;(2)灭活的PR8与未灭活的H3N2共同感染鸡胚24h后收获病毒混合液;(3)灭活的H3N2与未灭活的PR8共同感染鸡胚24h后收获病毒混合液。共同转染NA-105、NA-199和HA-56、HA-802 siRNA抑制病毒混合液中的PR8病毒增殖,通过噬斑实验筛选单克隆并用RT-qPCR和RT-PCR对病毒进行鉴定。经多轮筛选鉴定并未检测到重配株存在,并对可能的原因进行了分析。在MTY6细胞上用siRNA对PR8病毒连续抑制三代后,通过深度测序检测了siRNA作用下流感病毒基因的突变情况。