论文部分内容阅读
海洋微藻可以合成不饱和脂肪酸EPA、DHA等多种活性物质，在医疗和保健品开发中具有很高的应用价值。小球藻和三角褐指藻是海水养殖系统中常用的单细胞微藻，不仅营养价值含量高、富含不饱和脂肪酸，且繁殖能力强，易于室内或户外规模化培养。为了获得EPA产量更高的藻种,本实验对这两种藻进行了玻璃化冻存、培养条件优化和诱变育种的初步研究。玻璃化保存法是藻种保存中较好的方法，能达到长期保存的效果。在玻璃化冻存中主要以甘油、二甲基亚砜（DMSO）、乙二醇、丙二醇、蔗糖及海藻糖等作为抗冻保护剂。结果表明：由乙二醇、甘油和蔗糖组成的玻璃化液冻存试验中，小球藻和三角褐指藻的存活率最高分别为70.2%、45.6%。对两种微藻生长及产EPA的培养条件进行研究。小球藻生长和高产EPA的较适营养盐浓度为：NaNO3150mg/L，Na2HPO42H2O10mg/L，Na2SiO39H2O5mg/L，Na2EDTA1.09mg/L，6-BA0.5mg/mL，在此条件下培养小球藻的比生长速率为0.2606，EPA含量为21.26mg/g，相比于F/2培养基，分别提高了86.3%，53.7%。三角褐指藻生长和EPA积累的最适营养盐条件为：NaNO375mg/L，Na2HPO42H2O2.5mg/L，Na2SiO39H2O10mg/L，Na2EDTA2.18mg/L，6-BA0.5mg/L，IAA10mg/L，在此条件下培养其生长速率和EPA产量分别比基础培养基（F/2）提高了70.8%和66.6%。对两种微藻进行了传统的紫外诱变和EMS诱变。小球藻和三角褐指藻在紫外线照射距离35cm下适宜的诱变时间分别是20min及15min；EMS诱变的适宜浓度分别为0.8%及0.6%。通过单细胞分离技术得到小球藻突变株UC1和EC1以及三角褐指藻突变株UP1和EP1。其EPA产量分别比对照组提高了2.28%，8.97%，19.50%，24.88%。通过条件优化得到诱变株UC1、EC1、UP1、EP1产EPA的最适条件为：NaNO375mg/L，pH7.5，昼夜温度分别是23－21℃、17－15℃、17－15℃、17－15℃；接种量分别是7%、12%、10%、12%；培养天数分别为13、7、7、7。传代实验表明，突变藻株具有较好的遗传稳定性。