【摘 要】
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目的利用高通量基因表达数据库（GEO）中的芯片数据,分析HIF1A基因（编码缺氧诱导因子1α亚基蛋白）在成釉细胞瘤（AM）患者肿瘤组织与瘤旁正常组织中的表达差异;探讨转录因子超家族成员缺氧诱导因子1α亚基（HIF-1α）蛋白在AM肿瘤组织、瘤旁正常组织及分期手术治疗成釉细胞瘤患者手术标本中的表达差异;结合AM患者临床数据信息分析HIF-1α蛋白的表达差异对AM患者预后的影响以及分期手术治疗AM的可
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目的利用高通量基因表达数据库（GEO）中的芯片数据,分析HIF1A基因（编码缺氧诱导因子1α亚基蛋白）在成釉细胞瘤（AM）患者肿瘤组织与瘤旁正常组织中的表达差异;探讨转录因子超家族成员缺氧诱导因子1α亚基（HIF-1α）蛋白在AM肿瘤组织、瘤旁正常组织及分期手术治疗成釉细胞瘤患者手术标本中的表达差异;结合AM患者临床数据信息分析HIF-1α蛋白的表达差异对AM患者预后的影响以及分期手术治疗AM的可行性。方法通过生物信息学方法,采用GEO数据库的GSE132472芯片数据集以及GPL16699平台信息,分析HIF1A基因在AM患者肿瘤组织和瘤旁正常组织中的表达差异;以管家基因β-actin作为内参校正,应用荧光实时定量PCR（q RT-PCR）和Western-blot方法检测5对新鲜AM肿瘤组织及其瘤旁正常黏膜组织标本中HIF-1α的m RNA和蛋白表达水平;利用免疫组织化学染色（IHC）的方法检测45例AM患者组织标本中HIF-1α蛋白表达情况;对符合纳入标准的22例AM患者采用分期手术治疗（该术式本课题组前期已有相关研究并已发表）,观察患者一期二期两次手术标本中HIF-1α的表达情况及其与患者预后之间的关系,分析其可行性。结果1、GEO数据库GPL16699平台的GSE132472芯片数据集的分析得出AM肿瘤组织和瘤旁正常组织中HIF1A基因的表达存在明显统计学差异（P＜0.05）;2、q RT-PCR结果显示,HIF1A基因在AM肿瘤组织中的m RNA表达水平显著高于瘤旁正常口腔粘膜组织,差异有统计学意义（P＜0.05）;3、Western-blot结果显示,HIF-1α蛋白在AM肿瘤组织与瘤旁正常组织中的表达存在显著性差异,差异具有统计学意义（P＜0.05）;4、免疫组织化学染色结果显示,HIF-1α蛋白在45例AM中存在高表达,阳性表达率为（46.7%）,显著高于牙囊组织（0%）（P＜0.05）;HIF-1α蛋白的表达量在两组患者初次手术标本中差异不明显,不具有统计学意义（P＞0.05）,但在分期手术治疗患者第二次手术时所取组织标本中HIF-1α蛋白表达（平均评分1.68）较第一次手术所取组织标本中HIF-1α蛋白表达（平均评分2.55）明显降低（P＜0.05）;另12例AM复发患者手术标本中的HIF-1α蛋白表达（平均评分3.55）显著高于33例未复发AM患者手术标本中的HIF-1α蛋白表达（平均评分2.02）（P＜0.05）,证明其高表达与疾病的复发密切相关;HIF-1α蛋白在AM亚型中的表达无显著差异（P＞0.05）;5、临床资料统计显示,AM复发与患者年龄、性别、肿瘤大小以及肿瘤部位无显著相关性（P＞0.05）,与患者的手术方式有关,采取传统保守治疗的患者平均复发期显著高于施行二期治疗手术患者的平均复发期（P＜0.01）。结论1、HIF1A基因在AM肿瘤组织中的表达量显著高于瘤旁正常组织,在AM中存在HIF1A表达升高;2、AM组织在m RNA和蛋白水平上均存在高表达的HIF-1α,HIF-1α蛋白高表达很可能与AM的侵袭和复发有关,HIF-1α可能成为预测AM患者预后的有效指标和AM的治疗新靶点;3、根据免疫组化结果,第二次手术标本中HIF-1α蛋白的表达量显著低于第一次手术标本,分期手术治疗可以有效改变肿瘤微环境,降低病灶区HIF-1α蛋白的表达,显著降低AM患者平均复发期、提高患者生存质量。分期治疗AM切实可行。
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