论文部分内容阅读
目的:探索长链非编码RNA ABHD11-AS1在四种不同胰腺癌细胞(PANC-1,SW1990,PaTu8988和BxPC-3)中的表达差异。探讨长链非编码RNAABHD11-AS1在胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭中的影响,而后分析长链非编码RNAABHD11-AS1在胰腺癌细胞上皮-间质转化过程中的作用,并对产生这一作用的可能的机制作出探讨。方法:1、应用实时定量PCR方法分别检测四种胰腺癌细胞(PANC-1,SW1990,PaTu8988和BxPC-3)中长链非编码RNAABHD11-AS1的表达水平。2、购买sh-ABHD11-AS1和shEGFP干扰质粒以及pcDNA3.1-ABHD11-AS1和pcDNA3.1过表达质粒;用sh-ABHD11-AS1和shEGFP质粒转染长链非编码RNA ABHD11-AS1表达量相对较高的两种胰腺癌细胞(PaTu8988和SW1990),同时用pcDNA3.1-ABHD11-AS1和pcDNA3.1质粒转染长链非编码RNA ABHD11-AS1表达量相对较低的两种胰腺癌细胞(PANC-1和BxPC-3),并检测干扰及过表达质粒在胰腺癌细胞里的转染效率。3、CCK8细胞增殖实验以及成克隆实验用于检测长链非编码RNAABHD11-AS1在胰腺癌细胞增殖及克隆形成中的作用。4、在胰腺癌中,transwell迁移实验和划痕实验用于探索干扰和过表达长链非编码RNAABHD11-AS1对细胞迁移能力的作用。5、Transwell侵袭实验用于验证上调和下调长链非编码RNA ABHD11-AS1对胰腺癌细胞侵袭能力的影响。6、蛋白免疫印迹法检测长链非编码RNAABHD11-AS1对上皮-间质转化有联系的蛋白表达水平的影响。7、蛋白免疫印迹法检测长链非编码RNA ABHD11-AS1与Hippo-YAP通路的相关蛋白的表达水平。结果:1、在PaTu8988和SW1990细胞系中ABHD11-AS1表达相对较高,而在PANC-1和BxPC-3细胞系中ABHD11-AS1表达相对较低。2、在ABHD11-AS1表达量相对较高的PaTu8988和SW1990细胞中用含shABHD11-AS1及sh-EGFP质粒转染,定量PCR结果显示sh-ABHD11-AS1有较强干扰效率。同时ABHD11-AS1表达量相对较低的PANC-1和BxPC-3中转染过表达质粒pcDNA3.1-ABHD11-AS1和pcDNA3.1,定量PCR检测表明pcDNA3.1-ABHD11-AS1有较强的过表达效果。3、在PaTu8988和SW1990细胞中干扰ABHD11-AS1后,胰腺癌细胞的增殖及克隆形成能力减弱。相反地,在PANC-1和BxPC-3细胞中过表达ABHD11-AS1后,胰腺癌细胞的增殖及克隆形成能力增强。4、下调ABHD11-AS1后,PaTu8988和SW1990细胞的迁移、侵袭能力减弱,上调ABHD11-AS1后,PANC-1和BxPC-3细胞的迁移、侵袭能力增强。5、下调ABHD11-AS1后,对于PaTu8988及SW1990细胞系,上皮标志蛋白的表达水平增高,而且间质标志蛋白的表达水平降低。在ABHD11-AS1上调后,对于PANC-1及BxPC-3细胞系,上皮标志蛋白表达水平增高,而且间质标志蛋白表达水平降低。6、降低ABHD11-AS1后,PaTu8988以及SW1990细胞内Hippo-YAP的通路相关蛋白p-Lats1、p-YAP表达水平呈上升趋势,Lats1、YAP蛋白却没有明显的变化。上调ABHD11-AS1后,PANC-1以及BxPC-3细胞内Hippo-YAP的通路相关蛋白p-Lats1、p-YAP、p-MOB1蛋白表达水平呈下降趋势,而YAP蛋白表达呈上升趋势。结论:在四种胰腺癌细胞中lncRNAABHD11-AS1表达水平存在差异。ABHD11-AS1促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。ABHD11-AS1可能通过Hippo-YAP通路调控胰腺癌细胞的上皮-间质转化。