【摘 要】
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角膜对紫外线（UVB）辐射异常敏感,长期接受紫外辐射会造成角膜细胞损伤凋亡,导致角膜各种病变。实验采用标准体重的Wistar雌鼠,利用角膜上皮组织块培养法获得原代大鼠角膜上皮细胞（RCE细胞）,通过瑞氏／吉姆萨、中性红、HO33258、DAPI染色进行细胞形态学观察,DAPI染色和MTT法绘制细胞生长曲线,Western Blot分析细胞中caspase-3的表达变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果
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角膜对紫外线（UVB）辐射异常敏感,长期接受紫外辐射会造成角膜细胞损伤凋亡,导致角膜各种病变。实验采用标准体重的Wistar雌鼠,利用角膜上皮组织块培养法获得原代大鼠角膜上皮细胞（RCE细胞）,通过瑞氏／吉姆萨、中性红、HO33258、DAPI染色进行细胞形态学观察,DAPI染色和MTT法绘制细胞生长曲线,Western Blot分析细胞中caspase-3的表达变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果显示：正常的RCE细胞贴壁后呈多边形,伪足长而宽,染色后可观察到核仁；UVB对细胞的影响呈时间和强度依赖性,照射大于90min（108mJ/cm2）,细胞伪足收缩变短,胞质皱缩,照射大于150min（180mJ/cm2）,细胞成片悬浮死亡；凋亡细胞核染色质凝集,断裂成几个大的团块,核膜出现缺口并逐渐消失；正常细胞生长曲线为“S”型,铺板后40h左右为对数生长期,70h以后进入平衡期；辐射后的细胞培养至30-40h数量达到最低；UVB诱导细胞中caspase-3表达增加,照射120min组表达量最高,60min和180min组最低,照射后继续培养Oh组最高,48h组最低；早期凋亡细胞随辐射时间的延长而增加,晚期凋亡细胞和坏死细胞数量极少。 以上结果表明,UVB辐射能够引起RCE细胞凋亡,当辐射强度为20μW/cm2,其对细胞的影响为时间依赖性,产生凋亡应答的辐射时间阈值为90-150min（108-180mJ/cm2）,此外,细胞对UVB辐射的凋亡应答还与其增殖能力和密度相关。
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