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目的本研究的主要目的是探讨体内回输正常Treg细胞及改变miR-146a表达水平的Treg细胞对小鼠心脏移植免疫排斥反应的影响。方法首先我们在体外采用流式细胞仪分选近交系C57小鼠脾脏中的CD4~+CD25~+Treg细胞,然后把分选的细胞应用磁珠原理的美天旎扩增试剂盒联合高浓度IL-2进行体外扩增。参照文献及课题组前期实验,为达到上调或下调Treg细胞中miR-146a的表达水平的目的,我们分别通过miR-146a agomir及antagomir进行细胞调控。建立小鼠腹部异位心脏移植模型,分别设立生理盐水对照组,正常Treg组,miR-146a上调组,和miR-146a下调组。各组模型建立完成后立即通过小鼠阴茎背静脉注射回输相应Treg细胞(细胞数量为1×10~6),观察供心存活情况测得生存曲线,在术后第7天取供心进行病理学分析,采用流式细胞术检测各组受体脾脏中T细胞亚群,为了解供心中细胞因子的表达水平的变化采用RT-PCR检测IFN-γ、IL-4和IL-17。结果1.流式分选所得Treg细胞纯度为89.5%。经扩增试剂盒联合高浓度IL-2扩增后,Treg细胞数量增加10倍,纯度为92.3%。扩增前后的miR-146a表达水平在统计学上无显明显异(p<0.05)。2.与生理盐水对照组相比,正常Treg组和miR-146a上调组的生存时间得到明显的延长(p<0.05),所移植供体心脏的炎症分级显著降低(p<0.05),CD4+T细胞数量显著降低(p<0.05),CD8+T细胞数量无明显区别(p>0.05),Th1、Th2和Th17细胞数量无明显差别(p>0.05),供心IFN-γ、IL-4和IL-17的表达水平无明显差别(p>0.05);而miR-146a下调组生存时间较生理盐水对照组无显著统计学差异(p>0.05),所移植供体心脏的炎症分级无明显区别(p>0.05),CD4+T细胞数量显著降低(p<0.05),CD8+T细胞数量无明显区别(p>0.05),Th1细胞数量显著增多(p<0.05),Th2和Th17细胞数量无明显区别(p>0.05),供体心脏中IFN-γ的表达水平显著高于生理盐水对照组(p<0.05),但IL-4和IL-17的表达水平无显著性差异(P>0.05)。3.与正常Treg组相比,miR-146a上调组的生存时间更长(p<0.05),急性排斥反应更轻微(p<0.05),CD4~+T细胞的数量显著降低(p<0.05),CD8+T细胞的数量无明显区别(p>0.05),Th1、Th2和Th17细胞数量以及供心IFN-γ、IL-4和IL-17的表达水平无明显差别(p>0.05);而miR-146a下调组生存时间较正常Treg组显著缩短(p<0.05),所移植供体心脏的炎症分级显著升高(p<0.05),CD4+、CD8+T细胞数量无明显区别(p>0.05),Th1细胞数量和供心IFN-γ的表达的水平显著升高(p<0.05),Th2和Th17细胞数量及IL-4、IL-17的表达水平无明显区别(p>0.05)。结论流式分选技术能够有效分选Treg细胞,保证细胞纯度,扩增试剂盒联合高浓度IL-2可以体外有效的扩增Treg细胞,扩增前后Treg细胞miR-146a的表达无显著差异。转染试剂能够有效调控Treg细胞miR-146a表达。回输Treg可明显抑制小鼠心脏移植的急性排斥反应,上调Treg细胞内miR-146a的表达能增强其抑制功能减轻移植物的炎症分级,而下调miR-146a的表达却减弱其抑制功能。