桔小实蝇为害柑橘的生物学特性及其嗅觉感受机制研究

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桔小实蝇是一种重要的检疫性害虫,可选择香蕉、柑橘和芒果等多种水果作为寄主,其危害方式主要是以雌虫产卵于果皮下,幼虫取食果肉,从而导致水果腐烂或未熟先黄而落,严重影响了水果的产量和品质,有的甚至完全失去食用价值,给水果产业造成了严重的经济损失。目前对桔小实蝇的综合防治过程中,诱剂诱杀是一种既有效又环保的防治措施,但目前采用的甲基丁香酚仅引诱雄虫,而桔小实蝇的危害方式特殊,给防治带来困难。此外,化学防治又不符合绿色环保的理念,所以开发桔小实蝇雌虫诱剂已成为一种新的生防思路。本论文研究桔小实蝇为害几种不同柑橘的生物学特性及其嗅觉感受机制,为开发桔小实蝇雌虫诱剂提供实验依据。主要是研究内容和结果如下:1.桔小实蝇取食不同柑橘年度间生物学特性的差异研究连续两年对桔小实蝇取食4类7种柑橘,即宽皮柑橘类的大叶尾张、本地早、宫川、椪柑,杂柑类的胡柚,金柑类的金桔,和枸橼类的柠檬等柑橘类果实后生活史变化的观察,结果表明桔小实蝇的幼虫历期与蛹历期呈显著的负相关性,相关系数为-0.812;而一般,虫轻蛹壳重与虫重蛹壳轻的,其存活率均不高;而蛹壳重(0.95mg-1.0mg)或虫体重适中(12mg-15mg)的桔小实蝇存活率均较高。尤其是金桔,两年的存活率分别为95%与80%,均属第一位;其次是椪柑、本地早等宽皮桔类,以柠檬和宫川为最低。不同年度间宽皮橘和杂柑类各品种上的性比较稳定,性比值均>1,其中椪柑上雌虫数稳定多于雄虫;而胡柚上雄虫数稳定多于雌虫。此外,根据幼虫历期及其相应的成虫或蛹及蛹壳的轻重,可初步推断金桔是桔小实蝇生长较适宜的果品,而柠檬为不太适宜的果品。经生命表分析,在胡柚上桔小实蝇净增殖率R0、内禀增长率rm与周期增长率λ最大,种群加倍时间DT最短;在柠檬上R0、rm和λ值最小,而T和DT最长,而其他品种间差异不大。2.桔小实蝇气味结合蛋白BdorOBP2的基因克隆、表达和纯化利用PCR技术克隆得到了桔小实蝇气味结合蛋白基因BdorOBP2开放阅读框全长,GenBank登录号为KC773766。序列分析表明,BdorOBP2的ORF长约447bp,编码了148个氨基酸;多重序列比对结果表明,BdorOBP2蛋白与拟黄果蝇和黑腹果蝇的序列相似性最高;通过系统发育分析,桔小实蝇与双翅目昆虫的亲缘关系较近,特别是葱地种蝇的DantOBP2。并且构建了BdorOBP2原核表达载体,诱导表达获得了BdorOBP2重组蛋白,为下一步的荧光结合实验打下了基础。3.桔小实蝇气味结合蛋白BdorOBP2的结合特性荧光竞争结合实验结果表明,BdorOBP2与醛类和酯类物质的结合能力较强,而与醇类和烯类化合物的结合能力较弱。在酯类化合物的结合实验中,除顺3-己烯乙酸酯和水杨酸甲酯外,大多数气味挥发物都能将1-NPN与BdorOBP2的结合率降至50%以下;在醛类化合物中,除乙醛外,几乎都能将1-NPN与BdorOBP2的结合率降至50%以下,其中苯甲醛和3,4二甲基苯甲醛的结合能力最强,并且它们可以将相对荧光值竞争至10%或以下;BdorOBP2与β-紫罗兰酮的结合能力也较强,且也能够将1-NPN与BdorOBP2的结合率降至7%。这表明这些重要的挥发性物质在桔小实蝇对寄主水果进行定位、产卵和危害等过程中发挥着重要的作用。4.桔小实蝇对挥发性物质的触角电位反应触角电位反应结果显示,桔小实蝇对大多数酯类和醛类物质具有较高的反应活性,这与结合实验结果基本一致。桔小实蝇雌虫对反-2-己烯醛和苯甲醛均能产生较强的电生理反应活性,而水杨酸甲酯却能对雄虫产生较强的反应活性,在荧光结合试验中癸醛是结合较好的一种配基,但在EAG试验中此种化合物却不能引起桔小实蝇触角强烈的电生理反应。可能的原因是EAG试验测定的是触角中所有触角感器的整体活性,而BdorOBP2只是存在于桔小实蝇触角感器中的一种蛋白,而昆虫的感器中存在着很多OBPs,可能这些OBPs通过在嗅觉系统中分工来对不同气味物质作出反应。
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