通脉丸对动脉硬化闭塞症大鼠外周血内皮祖细胞数量和功能的影响

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目的:观察中药制剂通脉丸对动脉硬化闭塞症大鼠外周血内皮祖细胞数量和功能的影响。方法:1建立动脉硬化闭塞症大鼠模型实验采用雄性SD大鼠60只,随机分为对照组30只、造模组30只。对照组给予基础饲料喂养,不做特殊处理;造模组大鼠采用高脂饲料喂养,并分离双侧股动脉分支,结扎并离断,后用齿镊夹持股动脉约30秒,每4周肌注维生素D330万u/kg一次。8周后,各组随机挑选2只大鼠,检验血清TC、TG、LDL-C、HDL-C的含量,并在显微镜下观察股动脉组织切片,用于证实造模成功。2通脉丸对内皮祖细胞数量和功能的影响将24只ASO大鼠随机分为4组,对照组和低、中、高剂量组(1.5g/kg、5/kg、9g/kg),分别给予不同浓度通脉丸浓缩液(含生药剂量为1.5g/ml)灌胃,对照组用同等容积的生理盐水灌胃,7天后抽吸SD大鼠腹主动脉血液,分为两份,一份加入大鼠淋巴细胞提取液用于密度梯度离心法收取含单个核细胞,另一份离心用于获得通脉丸含药血清,冷藏备用。在用分离出的单个核细胞中加入VEGF和bFGF诱导分化,用EBM-2MV培养基加入10%的胎牛血清培养,接种在纤维连接蛋白包被24小时的培养板上培养7d后,收集贴壁细胞。采用免疫荧光染色法,FITC-UEA-1和Dil-ac-LDL双染色阳性细胞被鉴定为EPCs,用CCK-8、Tanswell小室和黏附能力测定实验,分别检测EPCs的增殖、迁移、粘附能力,收集实验数据进行统计学分析。结果:1.两组大鼠不同饲料喂养8周后体重无明显差异,造模后的模型组大鼠股动脉管腔狭窄、有血栓形成,内膜结构异常、中膜平滑肌增生并且向内皮下迁移,内弹力板破坏,内皮细胞脱落、结缔组织增生排列紊乱,斑块内可见泡沫细胞。2.通脉丸能增加雄性ASO大鼠EPCs数量,中剂量组(5g/kg)对EPCs数量的影响最为显著(P<0.05),且通脉丸能显著改善了EPCs的增殖、粘附和迁移等能力。结论:1.动脉硬化闭塞症模型可以被成功复制;2.通脉丸能增加ASO大鼠EPCs数量并改善其功能。
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