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目的:
探讨不同时期四种免疫抗原分子在正常和变性视网膜内的动态表达特点,揭示病理条件下受体的免疫状态,为视网膜移植免疫排斥反应及相关免疫性眼病的研究提供理论依据。
材料与方法:
分别取PN-0、1、2、3、4周龄C57BL/6和rd小鼠各8只,处死后,立即摘出眼球,制备冰冻切片,进行HE染色及CD45、MHC-Ⅱ、DEC-205、FasL免疫荧光染色,荧光显微镜观察摄片,图像分析软件进行半定量分析。
结果:
1、不同周龄C57BL/6和rd小鼠视网膜组织结构特点
C57BL/6小鼠:PN-0周龄时INL,ONL尚未分开,IS,OS未见分化,GCL细胞层次较多,RPE层发育较好;PN-1周龄时初步分化出INL和ONL,OPL出现,IS,OS仍未见分化,GCL细胞层次减少;PN-2周龄时10层结构均出现;PN-3w时GCL发育为单细胞层;PN-4周龄时视网膜已发育成熟。
rd小鼠:PN-0,1周龄时视网膜各级组织结构与正常小鼠相比未见明显异常;PN-2周龄时ONL变薄,PN-3周龄时ONL只剩一层细胞,PN-4周龄时部分区域RPE层直接与INL相接。
2、不同周龄C57BL/6和rd小鼠视网膜CD45表达特点
PN-2周龄时rd小鼠SRS内CD45表达强度高于正常组,PN-3,4周龄低于正常组。C57BL/6小鼠PN-0周龄时SRS内CD45不表达,以后逐渐增加,PN-3,4周龄时趋于稳定。rd小鼠SRS内CD45表达强度从PN-0周龄开始增加,PN-2周龄达到高峰,以后开始减少,PN-4周龄不表达。
各周龄rd小鼠视网膜IPL内CD45表达强度均低于正常组。C57BL/6小鼠PN-0周龄时IPL内CD45表达强度开始减少至PN-1周龄,PN-3周龄表达强度开始增高至PN-4周龄。rd小鼠PN-1周龄时IPL内CD45表达强度开始增加直至PN-4周龄。
3、不同周龄C57BL/6和rd小鼠视网膜IPL内MHC-Ⅱ表达特点
PN-0,4周龄rd小鼠视网膜IPL内MHC-Ⅱ表达强度低于正常组。C57BL/6小鼠视网膜IPL内MHC-Ⅱ表达强度各周龄基本不变。Rd小鼠视网膜IPL内MHC-Ⅱ表达强度PN-1周龄开始增加至PN-2周龄,PN-3周龄开始下降至PN-4周。
4、不同周龄C57BL/6和rd小鼠视网膜GCL内DEC-205表达特点
PN-0,1,2周龄rd小鼠视网膜GCL内DEC-205表达强度高于正常组,PN-3周龄低于正常组。C57BL/6小鼠视网膜GCL内DEC-205表达强度从PN-1周龄开始增加至PN-3周龄,以后基本不变。rd小鼠视网膜GCL内DEC-205表达强度PN-1周龄开始增加,PN-2周龄开始下降,PN-3周龄以后基本不变。
5、不同周龄C57BL/6和rd小鼠视网膜FasL表达特点
PN-2,3,4周龄rd小鼠RPE内FasL表达强度高于正常组。C57BL/6小鼠RPE内FasL表达强度从PN-1周龄至PN-4周龄逐渐下降。rd小鼠RPE内FasL表达强度各周龄基本不变。
各周龄rd和C57BL/6小鼠视网膜IPL内FasL表达强度没有明显差别。C57BL/6小鼠视网膜IPL内FasL表达强度PN-1周龄开始增加至PN-2周龄,以后基本不变。rd小鼠视网膜IPL内FasL表达强度PN-0周龄开始增加至PN-2周龄,以后基本不变。
结论:
在正常小鼠视网膜发育过程中,尽管IPL内FasL(免疫赦免相关抗原)表达增加,但是SRS,IPL内CD45表达增加,GCL内DEC-205表达增多,IPL内MHC-Ⅱ表达基本不变(抗原提呈相关抗原),RPE内FasL表达减少,提示尽管神经视网膜,RPE是免疫赦免组织,但是神经视网膜具有一定的免疫原性。在rd小鼠发生视网膜变性不同时期,SRS内CD45、IPL内MHC-Ⅱ、GCL内DEC-205的表达都有增加后减少的趋势,提示视网膜变性的早期中期,宿主的免疫反应性较强,此时进行视网膜移植发生免疫排斥反应的风险较大。