基于重组基因酵母的环境雌激素测定的影响因子和质量控制

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环境雌激素因能干扰人体内分泌系统而备受关注。本文针对水体环境雌激素管理的需求,比选出较适合实际水体应用且结果与人体健康相关度更大的测试方法----基于重组基因酵母的环境雌激素效应分析方法。在此基础上,通过实验优化了测试条件,考察了水样特性对测定结果的影响,并加入合适的质量控制手段,以提高测试结果的可靠性,使之真正适应复杂水体的环境雌激素测试工作。  本研究主要内容包括:⑴重组基因酵母的复苏与增殖可采用SD/-Trp/-Leu营养缺陷型培养基,30℃振荡培养,可在培养66 h后进行样品暴露;暴露环节可将样品与酵母混合液在20~35℃水浴条件下培养3~6 h;之后,使用有机溶剂处理法释放β-半乳糖苷酶,35℃水浴条件下反应60 min,0.5h后在420nm处比色分析;对于实际样品的分析,需要加测不少于一个的稀释水样效应值。⑵水样溶解氧、色度和浊度对测定结果影响也较小;其他特性,如微生物、pH以及水体中的一些毒性物质,由于可能会影响酵母的生长或基因表达,所以对分析结果可能造成一定影响,需要进行一定的处理。⑶建立质控措施,可以消除数据的异常变异。可以插入对重组基因酵母活性的检验过程,以避免假阴性结果;当样品中环境雌激素效应浓度介于0.025 nmol/L~0.25 nmol/L(以E2计)时,归一化后的的相对效应与环境激素浓度呈线性正相关,其线性斜率应该控制在4.76±1.35;此外,其中,空白建议控制在0.030±0.015之间;以0.10 nmol/L E2作为阳性对照的相对效应值控制在49%±15%为宜;平行双样的相对偏差则建议控制在30%以内。⑷控制好测量环境条件后,环境类雌激素测试不确定度的最主要因素为标准曲线拟合与样品分析的重复性;其次是不同环境或人员操作及样品采集过程的影响。
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