论文部分内容阅读
胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，占恶性肿瘤第二大死因。研究显示15%-45%胃癌患者出现HER2(HER2)过度表达。曲妥珠单抗（Trastuzumab，商品名Herceptin）是针对HER2受体的重组人源化单克隆抗体，可靶向结合于受体胞外IV区。2010年10月，美国FDA批准其用于HER2过表达的进展期胃癌和胃食管结合部肿瘤的临床治疗。临床数据显示曲妥珠单抗对胃癌的有效率可达30%，但患者多于一年后产生继发性耐受。因此，深入研究持续给予曲妥珠单抗产生的继发性耐药中的信号通路变化，探索曲妥珠单抗耐药的机制，制定新的治疗策略显得尤为重要。HER2是人类表皮生长因子受体(EGFR)家族成员之一，该家族还包括EGFR（HER1）、HER3（HER3）、HER4（HER4）三个成员。HER2是单链跨膜蛋白，胞内段具有酪氨酸激酶活性。与其他EGFR家族成员不同，HER2没有天然配体，在单体状态下无活性，它可自身形成同源二聚体或与EGFR、HER3、HER4形成配体非依赖或配体依赖的异源二聚体，激活下游信号通路，促进肿瘤细胞增殖。目前较明确的途径主要有两条：Ras-Raf-MEK-Erk/MAPK途径和PI3K-AKT-PKC-IKK途径。研究表明曲妥珠单抗继发性耐药产生的一个重要机制是通过过表达其他具有酪氨酸激酶活性的受体，这些受体通过自身同源二聚体化或与HER2形成异源二聚体，激活新的信号通路，从而促进肿瘤细胞增殖。在本研究中，我们成功构建对曲妥珠单抗耐药的NCI-N87裸鼠胃癌模型，并通过体外生长抑制实验和体内动物学实验验证了其对曲妥珠单抗的耐药性。取裸鼠肿瘤组织，通过免疫印迹检测耐药肿瘤组织和敏感肿瘤组织细胞信号通路变化，发现耐药肿瘤组织细胞EGFR表达上调，而对细胞增殖重要的AKT信号通路无明显变化，免疫共沉淀实验显示EGFR/HER2二聚体化增多。西妥昔单抗是EGFR的靶向药物，因此西妥昔单抗联合曲妥珠单抗对克服胃癌曲妥珠单抗耐药可能具有潜在意义。我们通过体内动物学实验探索曲妥珠单抗、西妥昔单抗，以及两抗体联合用药对肿瘤细胞的体内生长抑制，并通过免疫印迹探讨联合用药对其下游信号传导通路的影响进行了评价。本研究结果显示，我们构建的曲妥珠单抗耐药的NCI-N87R细胞和敏感株NCI-N87细胞相比，体内外实验对曲妥珠单抗的敏感性均明显下降。在裸鼠荷瘤实验中，与单独用药相比，联合用药在体外生长抑制实验及小鼠肿瘤模型中均显示出明显的抑瘤活性，并明显阻断EGFR/HER2异源二聚体的形成及下游MAPK和AKT通路的激活。综上所述，对曲妥珠单抗耐药胃癌的治疗，西妥昔单抗联合曲妥珠单抗用药比单独抗体治疗更有效，提示曲妥珠单抗和西妥昔单抗联合应用可望为克服临床治疗曲妥珠耐药胃癌提供有效策略。