基于液质联用技术的消癌解毒方药效物质基础研究

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消癌解毒方是在周仲瑛教授“癌毒”理论的指导下,根据肿瘤“痰瘀郁毒、阴伤气耗”的基本病机,在辨证与辨病相结合的基础上,以“消癌解毒,益气养阴”的方法,选择白花蛇舌草、八月札、僵蚕、蜈蚣、山慈菇、麦冬等以特定的比例组成的复方制剂。复方中的白花蛇舌草以清热消癌为君;八月札、山慈菇等以化痰祛瘀,解郁消癌为臣;配以麦冬益气养阴,扶正固本;全方具有清热解毒、化痰祛瘀、解郁消癌、益气养阴的功效。消癌解毒方具有扎实的中医临床疗效基础和研究应用前景,目前国内外对于消癌解毒方均是关于其药理作用及临床应用的报道,但是关于其化学成分及物质基础方面的研究均未见报道。中药复方是中医临床应用的主要形式。复方中的化学成分是各中药发挥药效作用的物质基础,目前在对中药复方化学成分进行LC/MS分析时,由于大量质谱数据的解析没有裂解规律可循,许多药用植物的质谱定性研究近乎空白;因此对消癌解毒方的单味药材进行全面的成分分析,总结单味药中主要化合物类型的质谱裂解规律,可为消癌解毒方化学成分的快速分析奠定基础。本论文以消癌解毒方及其组方中各单味药为研究对象,在其单味药的化学成分研究基础之上,对复方的化学成分进行了液质联用分析;采用系统溶剂法把消癌解毒方分成石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇部位,采用Walker-256大鼠肝癌模型,初步筛选出二氯甲烷和正丁醇部位为抗肿瘤的有效部位;采用液质联用技术对各有效部位的化学成分进行分析,初步阐明了消癌解毒方抗肿瘤的药效物质基础。研究主要包括以下几个方面:一、文献研究对消癌解毒方以及主要药味白花蛇舌草、八月札、麦冬、山慈菇、消癌解毒方的化学成分和药理作用研究进展进行综述。二、消癌解毒方及复方中单味药的化学成分研究采用UFLC-Q-TOF/MS技术,从白花蛇舌草中鉴别出33个化合物,主要为黄酮、蒽醌、环烯醚萜类成分;从八月札中鉴别出46个三萜皂苷类成分;从麦冬中检测出35个麦冬高异黄酮和36个麦冬甾体皂苷成分;山慈菇中鉴别出了15个化合物,主要为联苄和二氢菲类成分。在此基础上对消癌解毒方的水提液和醇提液采用UFLC-Q-TOF/MS技术进行分析,从水提液中检测出78个化学成分,从醇提液中检测出90个化学成分,为消癌解毒方药效物质基础研究提供依据。三、消癌解毒方化学成分数据库的建立在实验研究与文献研究的基础上,建立消癌解毒方相应的化学成分数据库。四、消癌解毒方药效物质基础研究采用系统溶剂分离法将消癌解毒方提取分离为石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位。采用Walker-256大鼠肝癌模型,筛选出消癌解毒方的有效部位为二氯甲烷部位(合并乙酸乙酯部位)和正丁醇部位,与模型组比较正丁醇有效部位组和二氯甲烷部位组的抑瘤率分别为36.96%和25.07%。对有效部位采用液质联用方法进行分析,从二氯甲烷部位中鉴别出48个化学成分,主要为黄酮和蒽醌类;从乙酸乙酯中鉴别出26个化学成分;从正丁醇部位中鉴别出68个成分,主要为黄酮和皂苷类。本论文基于液质联用技术,对消癌解毒方的化学成分进行了较系统的研究,筛选出抗肿瘤有效部位,并对有效部位的化学成分进行定性分析,初步阐明消癌解毒方的药效物质基础,为消癌解毒方的深入研究提供实验依据。
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