论文部分内容阅读
在高寒地区,寒冷是制约畜禽产业发展的重要因素之一,对动物的生产性能、抗氧化系统、免疫系统以及神经内分泌系统等方面产生影响。为了缓解冷应激对肉鸡的不利影响,我们采用温和冷刺激的方法对肉鸡进行训练,以免疫性能作为筛选指标,旨在找到提高肉鸡免疫机能和抗冷应激能力的最佳冷刺激方法。本研究以400只罗斯308肉雏鸡为研究对象,随机分为1个对照组和4个冷刺激组。对照组采用传统饲养温度饲养,冷刺激组则采用比对照组低3℃的冷刺激训练方式饲养,其中冷刺激组的冷刺激时长分别设置为3小时、4小时、5小时和6小时(分别记为CS3、CS4、CS5和CS6),冷刺激间隔时间为1天。检测冷刺激过程中肉鸡生产性能、免疫器官指数、血清中免疫球蛋白和细胞因子含量与免疫相关基因(Toll样受体、β防御素、细胞因子和免疫球蛋白)m RNA表达量水平,以及急性冷应激6小时和12小时前、后肉鸡法氏囊、脾脏和胸腺中热休克蛋白m RNA表达量水平,实验结果如下:1.生产性能:间歇式冷刺激对肉鸡的平均日采食量无显著影响(P>0.05),各组之间差异不显著(P>0.05)。间歇式冷刺激对肉鸡的平均日增重和料肉比有显著影响(P<0.05)。CS3组肉鸡的平均日增重显著高于对照组、CS4和CS6组(P<0.05),与CS5组间无显著差异(P>0.05);CS5组的平均日增重显著高于对照组(P<0.05),与CS4和CS6组间差异不显著(P>0.05)。冷刺激组中CS3组的料肉比显著低于对照组和其它冷刺激组(P<0.05),CS4、CS5和CS6组肉鸡的料肉比与对照组均无显著差异(P>0.05)。2.免疫器官指数:第22、29、36和43日龄,冷刺激组中肉鸡的法氏囊器官指数和脾脏器官指数与对照组相比均无显著差异(P>0.05),且冷刺激组间也无显著差异(P>0.05)。第49日龄,CS5组肉鸡的法氏囊器官指数与CS6组、对照组差异不显著(P>0.05),但显著高于CS3和CS4组(P<0.05);CS5组的脾脏器官指数显著高于CS3组(P<0.05),CS3组与CS4组、CS6组和对照组之间差异不显著(P>0.05),CS5组与CS4组、CS6组和对照组之间差异不显著(P>0.05)。3.血清中免疫指标:间歇式冷刺激21天后(即36日龄),肉鸡血清中Ig A和Ig G含量均显著高于对照组(P<0.05);CS5组血清中Ig G含量显著高于CS3组(P<0.05),CS4、CS5和CS6组之间差异不显著(P>0.05),CS3、CS5和CS6组之间差异不显著(P>0.05);肉鸡血清中Ig A含量在各冷刺激组之间差异不显著(P>0.05)。冷刺激组血清中IL-2含量均显著高于对照组(P?0.05),冷刺激组间IL-2含量无显著差异(P>0.05);冷刺激组中IFN-γ含量与对照组无显著差异(P>0.05);CS4组血清中IFN-γ含量显著高于CS6组(P<0.05),其余各组之间差异不显著(P>0.05)。冷刺激结束14天后(即49日龄),CS5组血清中Ig A含量显著高于对照组和其它冷刺激组(P<0.05);除CS5组外,Ig A含量在其余各组之间差异不显著(P>0.05)。CS4组肉鸡血清中Ig G含量显著高于对照组(P<0.05),CS3组、CS6组和CS4组与CS5组之间差异不显著(P>0.05)。CS5组肉鸡血清中Ig G含量显著高于CS6组(P<0.05);CS5组、CS3组和对照组之间差异不显著(P>0.05);CS6组、CS3组和对照组之间差异不显著(P>0.05)。4.免疫相关基因m RNA表达量:1)Toll样受体m RNA表达量:间歇式冷刺激21天后,冷刺激组肉鸡法氏囊中TLRs基因表达量均显著降低(P<0.05),CS4和CS5组中TLR1、TLR5、TLR15和TLR21均显著低于CS3组(P<0.05),其中CS5组中TLR3、TLR4和TLR7均低于CS4组(P<0.05);同时CS6组中TLR1、TLR4和TLR15均高于CS5组(P<0.05)。间歇式冷刺激使得肉鸡脾脏中TLR4、TLR5、TLR15和TLR21表达量显著高于对照组(P<0.05),其中CS5组中TLR4、TLR5和TLR21表达量均显著高于其余3个冷刺激组(P<0.05)。冷刺激结束14天后,CS5和CS6组的肉鸡法氏囊中TLRs表达量均显著低于对照组(P<0.05),除TLR21外,CS5组中其余指标均显著低于CS3组(P<0.05);另外,CS5中TLR1、TLR2、TLR3、TLR5和TLR21表达量也显著低于CS4组(P<0.05),与此同时,CS5中TLR2、TLR5、TLR7和TLR15显著低于CS6组(P<0.05)。冷刺激组中CS4、CS5和CS6组肉鸡脾脏中TLR3、TLR4、TLR7和TLR15的表达量均显著低于对照组(P<0.05),其中,CS5组中TLR7和TLR15同时显著低于其余3个冷刺激组(P<0.05)。间歇式冷刺激使得CS5和CS6组肉鸡胸腺中TLR1、TLR2、TLR3、TLR5、TLR7和TLR15的表达量显著低于对照组和CS4组(P<0.05),同时,CS6组中TLR2、TLR3、TLR4和TLR15均高于CS5组(P<0.05)。2)β防御素m RNA表达量:间歇式冷刺激21天后,CS4和CS6组肉鸡法氏囊中除Av BD8表达量显著降低(P<0.05)外,其余Av BDs指标差异不显著(P>0.05),CS5组中Av BD2和Av BD8均显著低于对照组且低于CS6组(P<0.05);CS3组肉鸡脾脏中Av BDs基因水平均升高(P<0.05),CS4和CS6组脾脏中均无指标降低,而CS5组中Av BD2表达量显著低于对照组(P<0.05);冷刺激组肉鸡胸腺中Av BDs基因水平普遍低于对照组(P<0.05),CS3和CS4组Av BD4、Av BD5和Av BD7降低(P<0.05),而CS5和CS6组中Av BD5、Av BD7、Av BD8和Av BD10均显著低于对照组(P<0.05),其中CS5和CS6组中Av BD8显著低于其余冷刺激组(P<0.05)。冷刺激结束14天后,肉鸡法氏囊中防御素基因表达量普遍下调(P<0.05),且CS5组法氏囊中Av BD2、Av BD4和Av BD7始终显著低于其它冷刺激组(P<0.05);CS5组肉鸡脾脏中Av BD4和Av BD7以及CS6中Av BD5基因水平显著低于对照组(P<0.05),并且CS5组中Av BD4和Av BD7表达量同时显著低于CS6组(P<0.05);冷刺激组肉鸡胸腺中Av BD7表达量均显著降低(P<0.05),另外,CS5和CS6组中Av BD2和Av BD10显著低于CS3和CS4组(P<0.05)。3)细胞因子m RNA表达量:间歇式冷刺激21天后,肉鸡的脾脏和胸腺中IL-2的基因表达量显著高于对照组(P<0.05),而且IL-6和IFN-γ的基因表达量水平在CS5组的脾脏和胸腺中也得到显著提高(P<0.05);此外,CS5组脾脏中IL-2和IL-8显著高于CS3和CS4组(P<0.05),胸腺中IL-2、IL-8和IL-17同时显著高于其余3个冷刺激组(P<0.05),而且CS5和CS6组胸腺中IL-17基因水平也显著升高(P<0.05)。冷刺激结束14天后,冷刺激组肉鸡的脾脏中IL-2的表达量水平仍显著高于对照组(P<0.05),而且CS5和CS6组中IL-2显著高于CS3和CS4组(P<0.05);除CS3组外,CS4、CS5和CS6组肉鸡胸腺中IL-2、IL-17和IFN-γ的基因表达量均显著升高(P<0.05),而且CS5和CS6组中IL-6均显著高于对照组、CS3和CS4组(P<0.05)。4)免疫球蛋白m RNA表达量:间歇式冷刺激21天后,CS4和CS5组法氏囊中Ig A和Ig G表达量显著高于CS3和CS6组(P<0.05),CS5和CS6组胸腺中Ig A均显著高于CS3和CS4组(P<0.05),CS5与CS6组中Ig A表达量水平无差异(P>0.05)但CS5中Ig G显著高于CS6组(P<0.05);脾脏中Ig G表达量均显著高于对照组(P<0.05),CS6组中Ig G表达量与CS5组中无差异(P>0.05)但显著高于CS3和CS4组(P<0.05)。冷刺激结束14天后,CS5和CS6组肉鸡法氏囊中Ig G显著高于CS3和CS4组(P<0.05);CS5组肉鸡脾脏和胸腺中Ig A表达量显著高于对照组和其它冷刺激组(P<0.05)。5.急性冷应激后热休克蛋白m RNA表达量:冷应激6小时后,冷刺激组和对照组肉鸡法氏囊中HSP40和HSP70表达量显著升高(P<0.05);CS4、CS5和CS6组肉鸡脾脏中HSP27、HSP40和HSP60表达量显著升高(P<0.05),而对照组肉鸡脾脏中HSP27显著升高(P<0.05)而HSP40和HSP60差异不显著(P>0.05);CS3和CS4组肉鸡胸腺中HSP40、HSP60和HSP70以及CS5和CS6组中HSP60、HSP70和HSP90表达量均显著升高(P<0.05),对照组胸腺中HSP60显著升高(P<0.05)而HSP70和HSP90显著下降(P<0.05)。冷应激12小时后,冷刺激组和对照组法氏囊中HSP40、HSP70和HSP90表达量均升高(P<0.05);冷刺激组肉鸡脾脏中HSP40、HSP60、HSP70和HSP90表达量升高(P<0.05),对照组脾脏中HSP40和HSP60升高(P<0.05)而HSP27和HSP70下降(P<0.05);CS4、CS5和CS6组肉鸡胸腺中HSP60、HSP70和HSP90表达量升高(P<0.05),对照组胸腺中HSP70升高(P<0.05)而HSP60和HSP90显著下降(P<0.05)。与冷应激6小时相比,冷应激12小时后,冷刺激组和对照组肉鸡法氏囊中HSP40、HSP70和HSP90表达量均升高(P<0.05);CS3、CS5和CS6组脾脏中HSP40、HSP60、HSP70和HSP90表达量均升高(P<0.05),CS4组和对照组脾脏中HSP40和HSP90表达量显著升高(P<0.05);CS5和CS6组中HSP40和HSP70与CS3和CS4组胸腺中HSP27表达量均显著升高(P<0.05),而对照组中HSP27和HSP40表达量差异不显著(P>0.05),冷刺激组与对照组中HSP60均显著下降(P<0.05)。综上所述,本研究得出以下结论:(1)间歇式冷刺激影响肉鸡生产性能。间歇式冷刺激3小时组和间歇式冷刺激5小时组的平均日增重提高,间歇式冷刺激3小时组的料肉比降低。(2)间歇式冷刺激对肉鸡免疫器官指数无显著影响。间歇式冷刺激5小时组有增强肉鸡法氏囊和脾脏器官指数的趋势。(3)间歇式冷刺激5小时组对肉鸡免疫机能有一定的增强作用。(4)间歇式冷刺激能够在一定程度上缓解冷应激对肉鸡所造成的损伤,且间歇式冷刺激5小时组抗冷能力更好。