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目的:生态病毒整合位点5(Ecotropic viral integration site 5,EVI5)作为调节细胞周期、胞质分裂和胞质转运的重要蛋白,在多种癌症中均被发现能促进肿瘤细胞的恶性进展。然而,EVI5与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)恶性转化之间的关系目前尚未见报道。在本研究中,我们探索了 EVI5对NSCLC增殖、迁移、侵袭的作用及其分子机制。方法:qRT-PCR法分别测定NSCLC组织及细胞株中EVI5和miR-486-5p的mRNA表达水平。Western-blot和免疫共沉淀方法测定NSCLC细胞株中EVI5及其相关蛋白的表达水平。流式细胞术测定NSCLC细胞株的周期与凋亡。CCK-8实验及Clonogenic实验测定不同处理组NSCLC细胞株的增殖速率的差别。Transwell实验和划痕实验测定不同处理组NSCLC细胞株的迁移和侵袭能力的差别。双荧光实验测定miR-486-5p与EVI5之间在NSCLC细胞株中是否存在靶向调控关系。采用小鼠移植瘤模型进行验证EVI5在体内发挥的作用。结果:(1)NSCLC术后临床肿瘤组织中EVI5的表达水平较相对应的正常癌旁组织高,此外,NSCLC细胞株中EVI5的表达水平较对应的正常支气管上皮细胞株16HBE也显著上调(P<0.05)。(2)在体外NSCLC细胞株中干扰EVI5后能明显抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及诱导NSCLC细胞发生G1期阻滞(P<0.05)。(3)成功构建了 EVI5 稳定敲除 NSCLC 细胞株(A549-EVI5-KO vs A549-Cas-9,H226-EVI5-KO vs H226-Cas-9)和 EVI5 稳定过表达细胞株(A549-PLVX vs A549-EVI5)。在NSCLC细胞株稳定敲除EVI5后,细胞的增殖、迁移和侵袭能力较对照组明显降低(P<0.05);在NSCLC细胞株中稳定过表达EVI5后,细胞株的生长、迁移和侵袭能力较对照组明显提高(P<0.05)。(4)体内实验表明EVI5稳定敲除后能明显降低移植瘤在裸鼠体内的生长速度以及降低肺转移的发生(P<0.001)。(5)EVI5与Emil在人NSCLC组织中具有正相关作用(P<0.001)。在NSCLC细胞株中,EVI5与Emil共表达。同时,在A549、H226细胞中,干扰EVI5后Emil,p-Akt、p-Erk、CyclinA2和CyclinD1的表达显著低于对照组。在EVI5过表达的A549细胞株中,干扰Emil后,能显著抑制EVI5异常高表达导致的NSCLC细胞株增殖。(6)EVI5 与 TGF-β receptor Ⅱ,TGF-β receptor Ⅰ 在 NSCLC 细胞株中共表达,在EVI5干扰细胞株,TGF-β receptor Ⅱ,TGF-β receptor Ⅰ及其下游相关分子的表达明显低于对照组;在NSCLC细胞株中干扰EVI5后,能显著抑制外源性TGF-β1导致的NSCLC细胞株迁移和侵袭能力(P<0.001)。(7)双荧光实验显示,在A549、H226细胞株中共转EVI5(WT/MUT)质粒和miRNA的模拟物(miR-NC/miR-486-5p),在共转EVI5野生型质粒和miR-486-5p过表达模拟物的NSCLC细胞株中,荧光素酶报告质粒荧光强度显著降低(P<0.05),在共转突变型质粒和miR-486-5p的NSCLC细胞株中荧光素酶报告质粒荧光强度无明显变化。(8)NSCLC术后临床肿瘤组织中miR-486-5p的表达水平较相对应的正常癌旁组织低,此外,NSCLC细胞株中miR-486-5p的表达水平也较对应的正常支气管上皮细胞株16HBE显著下调(P<0.05)。(9)在A549、H226细胞株中,过表达miR-486-5p能显著提高NSCLC细胞株的增殖、迁移和侵袭能力以及诱导细胞阻滞在G1期(P<0.05)。(10)回复实验显示,在A549细胞株中过表达EVI5同时外源性加入miR-486-5p mimics能显著降低由EVI5过表达引起的NSCLC的增殖、迁移和转移能力(P<0.001),以及能降低EVI5过表达引起的相关蛋白水平的上调。结论:EVI5在人NSCLC中高表达,并通过影响Emil进而导致细胞周期失调促进NSCLC的增殖能力,此外,EVI5还通过与TGF-β受体相互作用激活下游TGF-β/Smad信号通路从而影响NSCLC的迁移和侵袭能力。进一步实验发现EVI5高表达与miR-486-5p在NSCLC表达降低有关。综上,本研究可能为NSCLC治疗确定新的靶点提供理论依据。