肠炎沙门氏菌rpoE基因缺陷株的构建与rpoE功能初探

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肠炎沙门氏菌(Salmonellaenteritidis,S.E)是一种常见的食源性肠道致病菌,极易造成人类和畜禽食物中毒。其从外界环境进入机体并侵染宿主的过程中,经常遭受各种环境胁迫的刺激。rpoE基因编码的σE因子(又称σ24因子)可在转录水平上对热休克基因产生调控作用,进而编码热休克蛋白从而抵御环境胁迫的压力。本研究通过构建肠炎沙门氏菌rpoE基因缺陷株,考察缺陷株在环境胁迫下的生长能力和热胁迫下热休克基因的表达水平,用以研究rpoE在菌体响应环境胁迫过程中的基因功能。主要结果如下: 1.构建获得肠炎沙门氏菌rpoE基因缺陷株ΔrpoE。 利用Red同源重组系统,通过PCR构建具有rpoE同源臂的线性打靶片段,电击转化到含重组酶的肠炎沙门氏菌中,替换敲除了rpoE。经电泳和测序鉴定,最终获得缺陷株ΔrpoE。 2.环境胁迫条件下rpoE基因可显著调节菌体的生长能力。 设计四种不同的模拟环境胁迫条件——高低温、酸、氧、高渗,通过测定并绘制不同条件下野生株和缺陷株的生长曲线,比较发现缺陷株的生长能力显著弱于野生株。 3.热胁迫条件下,rpoE基因编码的σE因子可显著调节编码热休克蛋白70的关键基因的表达。 通过RT-qPCR方法,考察42℃热胁迫条件下,野生株和缺陷株中编码热休克蛋白70的关键基因——ftsA、hscA、eutJ、dnaK、grpE的表达水平,比较发现除grpE之外,野生株中ftsA、hscA、eutJ、dnaK的表达量均显著高于ΔrpoE,分别为ΔrpoE的2.1倍、1.63倍、2.38倍、2.61倍。
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