油茶组织培养技术研究

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油茶(Camellia oleifera)是我国南方重要的木本食用油料树种。本研究以油茶优良品种为试材,以其幼胚和未成熟子叶、嫩稍带芽茎段、嫩叶为外植体,通过组织培养技术,采用正交实验、方差分析和多重比较等方法,筛选出了油茶幼胚无菌苗最适培养配方以及未成熟子叶、带芽茎段、叶片的诱导与增殖培养、生根培养与移栽等各个阶段最佳培养基配方,建立了油茶幼胚和子叶、带芽茎段以及叶片的再生体系;此外,探索了油茶花药离体培养影响因子。主要结果如下1.油茶幼胚和未成熟子叶组织培养技术研究。油茶幼胚无菌苗的最适培养配方为WPM+6-BA2.0mg/L+NAA 1.5mg/L,成苗率为90%;未成熟子叶胚性愈伤组织诱导配方为:WPM+6-BA1.0mg/L+NAA 0.5mg/L,胚状体形成以及根芽分化的最适培养配方为:MS+6.BA3.0mg/L+NAA1.0mg.L-1。2.油茶带芽茎段组织培养技术研究。带芽茎段腋芽诱导的最适培养基配方为:1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L;增殖培养的最适培养基配方为:1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L,增殖倍数可达5倍以上;壮苗的最适培养基配方为:蔗糖2g/L+NAA0.1mg/L;采用1000ppm的IBA处理芽苗基部5S,转入1/2MS空白培养基培养,30d后芽苗的生根率为88.3%,平均生根条数为7.9%,整个再生体系的完成最短周期的一批苗仅需70d,经过炼苗后的油茶苗在泥炭:蛭石(1:1)的基质中生长,成活率最高,可达88.57%。3.油茶叶片组织培养技术研究。愈伤组织诱导的最适培养基配方为WPM+TDZ1.5mg/L+NAA0.5mg/L+6-BA2.0mg/L;愈伤组织分化丛生芽的最适培养基配方为:1/2MS+TDZ1.0mg/L+NAA0.1mg/L+ 6-BA2.0mg/L,可使诱导分化率达17.86%;分化芽增殖的最适培养基配方为:1/2MS+6-BA1.0 mg-L+IBA0.05mg/L,增殖系数达2.79;生根培养的配方为:1/2MS+TDZ0.05mg/L+IBA1.0mg/L。4.油茶花药离体培养影响因子研究。花药最适的低温保持方式为以带花蕾枝条的底部插入水中;花药的低温预处理时间应在10d以内;花药愈伤组织诱导的最适时期为花粉四分体时期;活性C、AgNO3以及Vc三种降低花药褐化的培养基添加物中,以AgNO3效果最优,其诱导率最高,为81%;最适增殖培养基配方为:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA。
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