【摘 要】
：
近年来,随着传统抗生素的不合理使用,致使残留问题日益严重,耐药菌株不断出现。因此,寻找抗生素替代物迫在眉睫。抗菌肽是生物体在抵抗外来微生物入侵时产生的一类防御性小肽,因其独特的优势有望成为抗生素的替代物。由于天然抗菌肽来源有限,从生物体内提取步骤繁琐,获得产量不高;化学合成法虽然可大量获得抗菌肽,但其合成成本相对较高;因此,通过基因工程实现抗菌肽的体外表达是今后的研究重点和发展方向。抗菌肽BSN-
论文部分内容阅读
近年来,随着传统抗生素的不合理使用,致使残留问题日益严重,耐药菌株不断出现.因此,寻找抗生素替代物迫在眉睫.抗菌肽是生物体在抵抗外来微生物入侵时产生的一类防御性小肽,因其独特的优势有望成为抗生素的替代物.由于天然抗菌肽来源有限,从生物体内提取步骤繁琐,获得产量不高;化学合成法虽然可大量获得抗菌肽,但其合成成本相对较高;因此,通过基因工程实现抗菌肽的体外表达是今后的研究重点和发展方向. 抗菌肽BSN-37是本实验室具有自主知识产权的牛源抗菌肽,该抗菌肽是由37个氨基酸组成(序列为:FRPPIRRPPIRPPFYPPFRPPIRPPIFPPIRPPFRPP),分子量为3.3kDa,前期的研究结果发现该抗菌肽具有较好的抗菌活性.为了获得高效的抗菌肽BSN-37,同时克服抗菌肽BSN-37对宿主细菌的破坏作用,本试验采用融合表达的方式,在大肠杆菌中表达具有较好抑菌活性的抗菌肽BSN-37. 根据抗菌肽BSN-37的氨基酸序列和大肠杆菌偏爱密码子,反向翻译出其基因片段,合成BSN-37基因,大小为126bp,并将其克隆至PUC57载体中,命名为PUC-BSN-37.将原核表达载体pGEX-6p-1和目的基因PUC-BSN-37经BamHⅠ和XhoⅠ分别双酶切后,通过T4DNA连接酶进行连接并转化大肠杆菌DH5α,构建pGEX-6p-1-BSN-37重组质粒,对重组质粒进行PCR、双酶切以及测序鉴定;将构建好的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,经SDS-PAGE和Western Blot检测显示:空载体工程菌在26kDa处有明显的标签蛋白GST的表达,而含有BSN-37的融合蛋白在30kDa处表达不明显或表达量很低. 为了提高抗菌肽BSN-37表达产量,本研究选择了SUMO分子伴侣在大肠杆菌中表达抗菌肽,以PUC-BSN-37为模板,分别设计含有XhoⅠ和HindⅢ双酶切位点的上下游引物,扩增出目的基因BSN-37;将融合型表达载体pCold-SUMO与目的基因BSN-37经XhoⅠ和HindⅢ分别双酶切后,通过T4DNA连接酶进行连接并转化大肠杆菌DH5α,构建pCold-SUMO-BSN-37重组质粒,并对重组质粒进行菌液PCR、双酶切以及测序鉴定. 将构建好的阳性质粒pCold-SUMO-BSN-37转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,经过对表达条件的优化,摸索出表达的最佳条件.结果显示:终浓度为0.4μM的IPTG在37℃、pH7.2的条件下诱导6h,表达效果最好.经SDS-PAGE电泳检测,表达产物是以可溶性形式存在. 由于BSN-37的N-端加了His标签,因而利用亲和层析的方法进行目的蛋白的纯化,并通过SDS-PAGE和Western Blot对其表达量进行检测;将纯化后的目的蛋白用SUMO蛋白酶在4℃酶切12h获得融合蛋白,经过浓缩除盐后再次进行纯化,获得目的蛋白;通过双层琼脂扩散试验对目的蛋白进行活性检测.结果显示:上清液中检测到的目的蛋白约为25kDa,而标签蛋白大小约为19kDa,与预期结果相符;酶切后的目的蛋白对沙门氏菌CVCC541具有良好的抑菌活性. 综上所述,本研究利用融合技术将抗菌肽BSN-37在大肠杆菌中获得可溶性表达,检测到了相应的抗菌活性,为进一步研究牛源抗菌肽的表达以及开发新型抗菌药物奠定基础.
其他文献
摘 要： 试题评讲要做到快速高效，可以采用核对答案法、点拨串讲法、举一反三法、讨论内化法等。评讲之前，教师要认真了解学情，做好充分准备，灵活运用多种方法，做到有的放矢。 关键词： 高效课堂 试题评讲 初中化学教学 考试后的试题评讲是初中化学教学中常见的课型之一。怎样评讲习题才能做到快速高效，且让不同层次的学生都有所获呢？笔者在教学实践中，主要采用了以下四种方法。 一、核对答案法 化学考试中
摘 要： 在生物教学中开展探究性教学，能够使知识多元化，有利于激发学生兴趣，活跃课堂气氛、提高学生结合能力。可以通过实验、现代教学技术、调查、提问题等手段落实生探究性教学。 关键词： 生物学 探究性教学 实验 现代教育技术 探究性学习是学生自主地获取知识和技能，体验和了解科学探究的过程和方法，形成和提高创新意识，树立科学的价值观的活动过程。关注社会热点，以能力立意，联系生产实际，考查学生能力，
随着现代社会的快速发展，学校的教学方式和教学手段也不断地丰富起来，以信息技术为依托的多媒体教学迅速进入课堂，应用于教育教学的各个领域。多媒体技术是指以计算机为核心，综合处理文、图、音、像等多媒体信息，通过教学设计，按教学目标的要求，把教学内容以生动活泼的方式呈现出来。通过多媒体教学，能激发学生的学习兴趣，多媒体的多感官刺激，有利于学生注意力的长久保持，从而达到增强教学效果，减轻师生负担的目的。化学
法律术语是内涵十分严密的词语,法制报道大量涉及法律术语。确切地说,法制报道是运用法律语言再现新闻事实的一种特殊报道,因此,不懂法律术语的规范,就不会有科学的法制报道
<正> 曾虚白先生的亲友因崇敬先生对新闻事业和新闻学术研究的贡献,设立曾虚白先生新闻奖基金会。从1975年始,每年评选一次。其方法是个人申请,由基金会聘请学者、专家
《生物统计学》是农科学生的专业基础课，这门课程是一门应用性很强的课程，其既有类似数学课程的逻辑性，又有与生物学科结合的适用性，这门课程对一般农科学生来说有些难度。在以往的教学中，教师主要是采用传统的板书教学方法。随着科学技术的进步，多媒体技术这一新的教学手段的应用越来越广泛，但是在使用过程中，也存在为了使用多媒体而使用多媒体的现象，有时甚至违背教学规律，学生对多媒体教学也有不同的感受和认识[1，2
摘 要： 要打造高中生物有效课堂，就必须把握有效课堂的形态和特点，转变传统的生物教学观念，教学做到目标明确，符合学生的实际，教案设计合理，并在练习中不搞机械练习和“题海战术”，精心设计结课环节，巩固良好的教学效果。 关键词： 高中生物教学 有效课堂 实践途径 有效教学的评价标准是学生的有效学习，其核心是学生的进步和发展。教学是否有效，关键是看学生学习效果的强弱，看有多少学生在多大程度上实现了有
本文作者赴人民大会堂采访九届人大二次会议屏幕上优秀的新闻作品，不仅能给观众人带来丰富的信息，而且能给观众带来一种思考，一种对事物观察、分析的全新的角度，一种对人们司空见
实验是生物教学活动中重要的，也是最主要的实践活动形式，在培养学生的创新能力方面起着重要的作用，它既是新课程提倡的重点内容，又是高考考查的一个趋势。因此，生物学实验教学必修打破按照教科书步骤照方抓药、按图索骥式的机械操作模式，激发抛开教科书和老师的束缚，放飞思维、展开想象，鼓励学生标新立异，别出心裁，大胆创新。引导学生把实验教学的注意力从实验结果的简单追求，转移到广阔的思维空间中来，这就要求教师改变
摘 要： 随着新课程改革的进一步深入，多媒体技术在教学中的应用促进了传统教育观念、教育机制、教育模式和手段的进一步更新，使整个教学活动呈现出全新的面貌。然而多媒体教学手段在教学中的运用，有如一把双刃剑，既有利，又有弊。本文对多媒体教学手段在生物教学中的优点进行阐述，以便在实际教学中更好地将其应用。 关键词： 多媒体 生物教学 应用 多媒体教学能将文字、声音、投影、DVD、包括计算机等多种教学媒