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目的本课题应用microRNA芯片筛选在胆囊癌中呈差异表达的miRNAs,初步研究其在胆囊癌发生发展中的作用及分子机制,为胆囊癌的诊治筛选出有效的诊断与治疗的靶点。材料与方法(1)应用human microRNA microarray检测分析4对胆囊癌组织及癌旁组织中差异表达的miRNAs,选择差异表达有显著意义的miRNA作为进一步的研究对象。应用qRT-PCR在45对胆囊癌组织与癌旁组织中验证miRNAs芯片的结果。运用Kaplan-Meier生存分析及多因素分析等统计方法分析miR-143-3p表达量与胆囊癌患者的临床病理因素及预后的关系。(2)进行体外和体内获得性与缺失性功能实验进一步研究miR-143-3p对胆囊癌细胞的增殖的影响。(3)利用生物信息学软件预测miR-143-3p的下游靶基因,结合双荧光素酶报告基因及Western blot等方法验证miR-143-3p的下游靶基因。免疫组化检测下游靶基因MYBL2在65对胆囊癌组织与癌旁组织中的表达情况,统计分析MYBL2表达量与胆囊癌患者的临床病理因素及预后的关系。体外细胞增殖实验、克隆形成实验、EdU实验、流式细胞分析、Western blot等方法与体内裸鼠皮下瘤实验验证MYBL2对胆囊癌细胞增殖的作用。应用免疫组化检测MYBL2与Ki67在裸鼠皮下瘤中的表达水平。过表达MYBL2与miR-143-3p共转染胆囊癌细胞后进行细胞功能及Western blot等回复实验,验证两者间的调控机制。结果(1)分析microRNA芯片及qRT-PCR验证,结果显示:miR-143-3p在胆囊癌组织及细胞系中均显著低表达。miR-143-3p表达水平与肿瘤浸润(P=0.035)及TNM分期(P=0.035)相关,Kaplan-Meier生存分析显示,miR-143-3p低表达的患者生存时间更短(P=0.002)。多因素生存分析发现miR-143-3p可以作为判断胆囊癌患者预后的独立危险因素。(2)miR-143-3p高表达在体外与体内均可抑制胆囊癌细胞的增殖。(3)明确MYBL2是miR-143-3p下游靶基因。(4)MYBL2在胆囊癌中促进癌细胞增殖,结合回复实验,提示miR-143-3p可以通过结合MYBL2的3’UTR的靶序列,下调MYBL2蛋白水平的表达,发挥抑制细胞增殖的作用。结论(1)miR-143-3p在胆囊癌中显著低表达,与胆囊癌患者的临床病理因素以及总体生存期相关,有可能成为一个潜在的判断预后与治疗的靶点。(2)miR-143-3p通过与靶基因MYBL2的3’UTR靶序列的结合,负性调控MYBL2蛋白翻译,通过影响细胞周期S期及G2/M期的转换,从而抑制胆囊癌细胞的增殖过程。