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目的: 通过交联过敏细胞表面的Fc?RI受体和抑制性FcγRIIb受体，可激活FcγRIIb受体的负调控信号，信号途径中5肌醇磷酸酶（SHIP）的磷酸化使Fc?RI信号途径中的关键信号分子脾酪氨酸激酶（Syk）脱磷酸化，阻断Syk启动的细胞脱颗粒作用，进而阻止过敏反应的发生。据此，本文构建一个鼠源的抗过敏融合蛋白（mouse anti-allergy fusion protein，mAAFP），mAAFP由小鼠IgE Fc段和IgG Fc段融合而成，理论上可同时作用于过敏细胞表面Fc?RI和Fc?RIIb受体，使其交联，达到抗过敏作用。本文通过探究mAAFP对IgE介导小鼠过敏反应的干预作用及其作用机制，以期获得药效良好作用机制清晰的结果，为IgE介导过敏性疾病药物的研究提供新的方向。 方法: （一）融合蛋白mAAFP的构建及表达 利用基因工程技术构建mAAFP重组蛋白，并用Invitrogen公司的Flp-InTM CHO表达系统进行蛋白表达。表达产物用Protein A亲和层析纯化，用高效液相色谱技术（HPLC）分析其纯度。 （二）融合蛋白mAAFP对IgE介导小鼠过敏反应的抑制作用及机制研究 1. BALB/c小鼠及FcγRIIb基因缺陷小鼠被动皮肤过敏反应实验 采用BALB/c小鼠及FcγRIIb基因缺陷小鼠被动皮肤过敏反应（PCA）模型，通过观察mAAFP对两种小鼠PCA反应的抑制效果，探究mAAFP对IgE介导过敏反应的抑制作用及其作用机制。 2. mAAFP对抗原诱导的体外肥大细胞脱颗粒时Syk、SHIP磷酸化水平的影响 采用抗原致大鼠肥大细胞（RBL-2H3）脱颗粒模型。用mAAFP处理致敏的RBL-2H3细胞，过敏原激发细胞，分别在2 min、5 min、10 min检测mAAFP对Syk和SHIP磷酸化水平的影响，进一步探讨mAAFP的作用机制。 （三）mAAFP对花生致小鼠过敏反应的干预作用 采用全花生提取物致C57BL/6小鼠及FcγRIIb基因缺陷小鼠过敏模型，以过敏症状评分、血浆中组胺的含量、体温为考察指标，探究mAAFP对花生引起的C57BL/6小鼠及FcγRIIb基因缺陷小鼠过敏的干预效果。 （四）mAAFP对卵白蛋白（OVA）致小鼠过敏性哮喘的干预作用 采用卵白蛋白（OVA）致BALB/c小鼠过敏性哮喘模型，以肺泡灌洗液中炎性细胞数目、肺组织病理损伤、气道高反应性（AHR）为考察指标，探究mAAFP对OVA致小鼠过敏性哮喘的干预效果。 结果: （一）融合蛋白mAAFP的构建及表达 成功构建mAAFP蛋白的Flp-InTM CHO稳定表达系统。Protein A亲和纯化后，蛋白产物纯度为97.319％，可用于后续动物实验研究。 （二）融合蛋白mAAFP对IgE介导小鼠过敏反应的抑制作用及机制初探 1. BALB/c小鼠及FcγRIIb基因缺陷小鼠被动皮肤过敏反应实验 成功构建了BALB/c小鼠及FcγRIIb基因缺陷小鼠被动皮肤过敏（PCA）反应模型。在BALB/c小鼠中，mAAFP低、中、高剂量组抑制PCA反应率分别为44.5%、65.6%、96%。说明mAAFP对IgE介导的过敏反应有良好的抑制作用。 在FcγRIIb基因缺陷小鼠中，mAAFP低、中、高剂量组对PCA反应均无抑制作用，说明mAAFP对PCA反应的抑制作用依赖FcγRIIb受体介导的抑制效应。 2. mAAFP对抗原诱导的体外肥大细胞脱颗粒时Syk、SHIP磷酸化水平的影响 在抗原致大鼠肥大细胞（RBL-2H3）脱颗粒模型中，无论激发2min、5min、10min均一致的观察到mAAFP降低Syk磷酸化水平，升高SHIP磷酸化水平。 （三）融合蛋白mAAFP对花生致小鼠过敏反应的干预作用 实验结果表明mAAFP显著减轻小鼠过敏反应的临床症状，显著抑制血浆中组胺的释放，显著抑制全花生提取物致敏C57BL/6小鼠体温的快速下降。说明mAAFP对IgE介导的花生急性过敏反应具有抑制作用。但是mAAFP对全花生提取物致敏FcγRIIb基因缺陷小鼠的急性过敏反应没有抑制作用，说明mAAFP在FcγRIIb基因缺失的情况下无法发挥药效。 （四）融合蛋白mAAFP对卵白蛋白（OVA）致小鼠过敏性哮喘的干预作用 实验结果表明mAAFP显著降低了肺泡灌洗液中炎性细胞的数目，明显改善小鼠肺组织的病理损伤，减轻由OVA诱导的肺组织气道炎症。mAAFP缓解了OVA诱导的AHR，提高了肺顺应性，降低肺阻力。 结论: 结果表明，mAAFP对小鼠花生过敏及过敏性哮喘均有一定的干预作用。机制研究证实，mAAFP的抗过敏作用是通过交联Fc?RI和FcγRIIb受体，促进SHIP的磷酸化，使得Fc?RI信号途径中的关键信号分子Syk发生脱磷酸化，从而阻断了Syk启动的细胞脱颗粒作用，阻止了过敏反应的发生。 该蛋白的疗效和作用机制与设计思路一致。该蛋白的成功研制，将为IgE介导过敏性疾病的治疗开辟新的途径。