目的:心肌缺血再灌注损伤(MIRI)是再灌注治疗冠心病难以回避的问题,八味沉香散是藏医临床治疗冠心病的经典常用藏医药方,但八味沉香散抗心肌缺血损伤的药效物质基础尚不明确。实验拟用冠脉结扎法建立心肌缺血再灌注损伤模型,研究八味沉香散抗心肌缺血再灌注损伤的作用;采用液相-质谱及气相-质谱分析八味沉香散中的主要化学成分,结合血清药物化学的方法,初步揭示八味沉香散保护心肌缺血再灌注损伤的药效物质基础,为临床应用提供科学的实验依据。方法:1、实验采用左冠状动脉结扎30 min,再灌注60 min的方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。将SD大鼠分为假手术组、模型组、八味沉香散低、中、高剂量组,各组于末次给药后进行造模。实验结束后腹主动脉取血,用于LDH、CK的检测,取血完成后取出心脏,用于观察心肌组织形态、心肌梗死面积、心肌组织病理形态学变化、心肌超微结构变化。2、实验运用UPLC-Q-Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术和气相色谱-质谱联用仪对八味沉香散化学成分进行检测。甲醇超声提取法提取八味沉香散复方非挥发油化学成分,用于八味沉香散复方非挥发油化学成分的检测分析;水蒸气蒸馏法提取八味沉香散复方挥发油化学成分,用于八味沉香散复方挥发油化学成分的检测分析。3、实验运用UPLC-Q-Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术对八味沉香散入血原型成分进行检测。将SD大鼠分为两组,空白组和八味沉香散药物组,空白组灌胃给予等同药物组体积的蒸馏水。通过分析和比对给予八味沉香散混悬液后的大鼠血浆和藏药八味沉香散复方提取物,初步确定血浆样品中的原型化学成分。结果:1、藏药八味沉香散对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用(1)八味沉香散对缺血再灌注大鼠血清LDH和CK活性的影响八味沉香散各剂量组均可降低心肌缺血再灌注损伤大鼠的血清LDH和CK活性,其中高剂量组效果最好。(2)八味沉香散对缺血再灌注大鼠心肌梗死面积的影响八味沉香散中、高剂量组明显改善了因缺血再灌注损伤造成的心肌梗死。(3)八味沉香散对缺血再灌注大鼠心肌组织病理学的影响八味沉香散各剂量组大鼠心肌组织损伤均比缺血再灌注模型组轻,尤其是高剂量组效果最为显著。(4)八味沉香散对缺血再灌注大鼠心肌超微结构的影响与模型组相比,八味沉香散低剂量组和中剂量组心肌细胞受损程度较轻;与模型组相比,八味沉香散高剂量组,心肌细胞结构正常。2、藏药八味沉香散体外化学成分的定性分析(1)八味沉香散体外非挥发油化学成分的定性分析通过对比八味沉香散复方提取物的总离子图、质谱图、相关文献数据及数据库等信息,从八味沉香散复方中初步鉴定出27个非挥发油化学成分。(2)八味沉香散体外挥发油化学成分的定性分析通过对比八味沉香散复方提取物的气相-质谱总离子图、相关文献数据及数据库等信息,从八味沉香散复方中初步鉴定出40个挥发油化学成分。3、藏药八味沉香散入血成分的定性分析通过分析比较八味沉香散体外样品、给药组血清总离子流图、质谱图、相关文献数据及数据库等信息,从给予八味沉香散的大鼠血清中共鉴定了16个原型入血成分。结论:1、本实验通过拟用冠脉结扎法建立心肌缺血再灌注模型,证实了八味沉香散对保护大鼠心肌缺血再灌注损伤有积极的作用,抗心肌缺血再灌注损伤作用显著,显著减少心肌缺血再灌注损伤大鼠的心肌梗死面积,从一定程度上改善了心脏功能。2、本实验采用UPLC-Q-Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术和气相-质谱联用技术初步确定藏药八味沉香散的化学成分67种(其中非挥发油化学成分27种,挥发油成分40种。)3、本实验根据中药血清药物化学研究思路,采用UPLC-Q-Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术初步分析藏药八味沉香散入血成分,确定出16种原型入血成分,以上入血原型成分多数具有一定抗炎抗氧化及保护心脏扩血管的作用,推测这16种原型入血成分可能为八味沉香散抗心肌缺血损伤的有效成分,初步揭示此药的药效物质基础,为八味沉香散防治缺血性心脏病提供科学的实验依据。