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膀胱肿瘤是最常见的泌尿生殖系肿瘤,目前膀胱肿瘤的治疗手段仍以手术、化疗、放疗及免疫辅助治疗为主。术后用药物进行膀胱内灌注是治疗膀胱肿瘤的重要手段,然而化疗后,仍有40%～80%的复发率,肿瘤细胞耐药性是临床化疗失败的主要原因。当肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物出现耐药的同时,对其他结构不同、作用靶位不同的抗肿瘤药物也产生耐药性,该现象称为多药耐药(Multidrug Resistance,MDR)。有报道,川芎嗪具有部分逆转人乳腺癌MCF-7/ADM对ADM的耐药性。无明显毒作用的TMP能显著逆转SPCA-1人肺腺癌细胞株对ADM的耐药性,等,从而提高肿瘤化疗疗效。其中以川芎嗪(tertramethylpyrazine TMP)为其主要成分。为此,我们将研究了川芎嗪逆转膀胱肿瘤MDR,同时初步探讨其作用机制。第一部分膀胱肿瘤T24细胞多药耐药模型的建立及耐药特性鉴定目的:建立人膀胱肿瘤T24细胞多药耐药模型并鉴定其耐药特性。方法:体外培养的膀胱肿瘤T24细胞,采用阿霉素浓度梯度诱导法,首先培养出具有稳定MDR表型的T24/ADM耐药细胞株,建立膀胱肿瘤T24/ADM耐药细胞膜型。光镜观察新建细胞系的形态学特点,RT-PCR检测膀胱肿瘤耐药细胞株mdr-1基因的表达情况。用MTT法测不同药物对膀胱肿瘤T24/ADM细胞多药耐药性,流式细胞术定量检测细胞P-gp的表达变化。结果:6个月后用阿霉素诱导后的T24/ADM细胞,对ADM有明显的耐药性,耐药指数(RI=16.3),并对其他药物也产生耐药性。T24/ADM细胞mdr-1基因和P-gp的表达明显增高。经方差分析,P＜0.01,各组之间存在具有显著统计学意义上的差异。结论:建立人膀胱肿瘤T24/ADM细胞,并具有多药耐药特性。第二部分川芎嗪对人胱肿瘤T24/ADM细胞多药耐药的逆转效应及P-糖蛋白表达的影响目的:探讨川芎嗪(TMP)对人膀胱肿瘤T24/ADM细胞多药耐药逆转效应及P-gp表达的影响。方法:MTT法测定耐药细胞的药敏性和抗药性逆转。流式细胞术检测耐药细胞P-gp的表达。结果:非细胞毒性剂量(320μg/ml)和低毒剂量(1250μg/ml)的TMP均能显著降低T24/ADM细胞的IC50(P＜0.01),逆转倍数分别为1.25和2.26倍;能显著增加耐药细胞内的ADM的浓度,并使该细胞P-gp的表达率由(91.25±0.40)%分别降低为(70.11±1.65)%和(51.36±1.25)%。经方差分析,各组之间存在具有显著统计学意义上的差异。P＜0.01各组间存在显著差异。结论:TMP可部分逆转人膀胱肿瘤T24/ADM细胞对阿霉素的耐药,其逆转机制与抑制该细胞P-gp的表达有关。